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工作目的:目前癌痛的产生机制尚未清楚,大多数研究认为中枢敏化在癌痛的产生和发展过程中占据重要地位,其中小胶质细胞的活化与各种疾病过程中中枢敏化的发生有关。外周神经损伤导致神经病理性疼痛形成期间,受伤的神经元会产生巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)作用于小胶质细胞表面的M-CSF受体(M-CSFR),活化小胶质细胞。但是目前关于M-CSF和骨癌痛的相关研究很少。本研究将通过建立小鼠骨癌痛模型,研究M-CSF在骨癌痛发展过程中的作用及相关机制,并针对其受体进行干预,给骨癌痛带来新的治疗靶点。研究方法:本实验使用小鼠股骨注射骨肉瘤细胞建造骨癌痛模型,机械缩足阈值(PWMT)和造模后测量自发抬足次数(NSF)来评估小鼠的疼痛阈值,从而判断该模型是否建立成功。Western blotting检测小鼠脊髓水平小胶质细胞标记物Iba-1、M-CSF、M-CSFR、IL-34及炎性因子的表达,免疫荧光法观察小鼠脊髓水平Iba-1以及M-CSFR的表达。在小鼠肿瘤接种14d时连续7d鞘内给予M-CSFR抑制剂PLX3397,痛行为学评估其镇痛效应。对正常小鼠鞘内给予小鼠重组M-CSF蛋白,连续三次,每次间隔12h,痛行为学评估其对小鼠痛觉的影响;Western blotting检测小鼠脊髓水平Iba-1、炎性因子TNF-α和IL-1β的表达、MAPK家族成员(p38、c-JNK及ERK)总量以及其磷酸化表达。免疫荧光法检测脊髓水平Iba-1的表达。结果:1.痛行为学检测发现小鼠肿瘤细胞接种后第14天有显著的NSF增多和PWMT减少,说明造模成功;2.Western blotting检测表明造模后分别在第4天和第10天,小鼠脊髓水平M-CSF和M-CSFR含量显著升高;3.造模后第14天鞘内给予M-CSFR拮抗剂PLX3397,连续7d,可明显减轻骨癌痛小鼠的疼痛,减少小胶质细胞活化、MAPKs磷酸化以及炎性因子的释放;4.对正常小鼠连续3次(每次间隔12h)鞘内给予M-CSF重组蛋白后,会诱发正常小鼠出现痛行为,增加小胶质细胞活化、MAPKs磷酸化以及炎性因子的释放,同时伴有小胶质细胞形态的改变。结论:小鼠在骨癌痛的过程中出现了 M-CSF和M-CSFR表达上调,脊髓水平M-CSF与M-CSFR的结合可能参与了小胶质细胞的激活。使用抑制剂拮抗脊髓水平M-CSFR的活动,可减少小胶质细胞活化,MAPKs磷酸化以及炎性因子IL-1β和TNF-α的释放,从而一定程度的缓解骨癌痛。