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高致病性禽流感(HPAI)是危害养禽业的烈性传染病之一。虽然常规灭活苗对控制禽流感的发生流行起到了非常重要的作用,但也存在难以克服的缺点,如存在散毒的潜在危险、不能有效激发细胞和黏膜免疫应答等,因此需要研究一种安全、高效的新型疫苗克服上述不足。减毒沙门氏菌可作为疫苗载体,通过自然黏膜感染途径运送DNA疫苗至宿主特定的免疫器官和细胞,表达外源抗原,激发机体产生保护性的细胞、体液和黏膜免疫应答。减毒沙门氏菌作为载体运送禽流感DNA疫苗,为禽流感的防治带来新思路和新手段。外源高拷贝质粒在沙门氏菌中通常不稳定,特别是含bla基因的高拷贝质粒在沙门氏菌中不稳定,已成为重组沙门氏菌疫苗载体研究的阻碍之一。另外,CpG DNA作为一种免疫佐剂,可增强DNA疫苗的免疫效果。本研究对高拷贝质粒pcDNA3.1+进行改造,获得了稳定性高的新质粒pmcDNA3.1+,在此基础上,构建出运送禽流感病毒DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌,并对其免疫生物学特性作了探讨。1.真核表达质粒pmcDNA3.1+的构建与鉴定通过除去真核表达质粒pcDNA3.1+中的氨苄青霉素抗性基因(bla基因)的启动子序列,构建了新的真核表达质粒pmcDNA3.1+。将pcDNA3.1+和pmcDNA3.1+通过电转化转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,获得阳性转化子,分别命名为SL7207(pcDNA3.1+)、SL7207(pmcDNA3.1+)。结果显示,在含与不含氨苄青霉素的培养基中SL7207(pmcDNA3.1+)均能稳定保留其质粒。SL7207(pmcDNA3.1+)的β-内酰胺酶活力明显低于SL7207(pcDNA3.1+),且接种SL7207(pmcDNA3.1+)的液体培养基中的氨苄青霉素不易被降解。腹腔接种小鼠7天后,脾脏中SL7207(pmcDNA3.1+)的质粒稳定性仍保持在95%以上,而SL7207(pcDNA3.1+)免疫后第3天99%丢失质粒。通过降低bla基因的表达水平,防止了培养基中抗生