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目的新月体肾炎(Crescentic glomerulonephritis CGN)是临床上发病迅速,短时间内造成肾脏功能急速恶化的肾小球肾炎。其中抗肾小球基底膜(GBM)型肾小球肾炎(抗GBM肾炎)最严重,预后最差,其主要是由抗GBM抗体介导的能够引起弥漫性肾小球受损的一种自身免疫性疾病。在其免疫进程中Th17和Treg细胞相互协调是新月体肾炎病情进展和转归的重要环节。而在该淋巴细胞成熟、存活、增殖和分化等过程中,一种螺旋-环-螺旋(IILH)蛋白E2a的作用更加明显。在抗GBM肾炎病情进展中,通过对E蛋白调节Th17和Treg细胞分化机制的研究,有助于探讨免疫反应活化的关键因素,为早期干预免疫反应,减轻病理损害提供理论依据。方法1.建立小鼠抗GBM肾炎模型,在不同的时间点(建模第7天、14天、21天、28天)将小鼠处死后收集并检测血清中的肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量,随机尿中尿蛋白及尿蛋白/肌酐比值(ACR)变化；留取肾脏标本检测病理改变。2.在对照组和肾炎模型组中,用流式细胞检测术(FACS)检测脾脏中Th17和Treg细胞表达情况；ELISA的方法检测IL-17A和TGF-β1含量;Western blot检测肾脏组织中E2a/Foxp3/Roryt等的蛋白表达；RT-PCR检测肾脏组织中E2a/ Foxp3/Roryt等的mRNA的表达。2.体外获得未分化CD4+T细胞,促进其增殖活化后分别诱导其向Th17和Treg细胞进行定向分化,培养6天。通过FACS、ELISA、Western blot和RT-PCR分别检测Th17和Treg细胞分化比例、分泌细胞因子水平及E2a/Foxp3/Roryt的表达。3.用E2a siRNA沉默naive CD4+T细胞后诱导向Th17和Treg细胞分化。RT-PCR和ELISA检测Foxp3/Roryt和IL-17A/TGF-β1/IL-10含量。结果1.成功建立抗GBM肾炎模型：与正常组小鼠相比,肾炎组小鼠肾脏病理示GBM不规则弥漫增厚甚至部分断裂、系膜细胞和基质增生、新月体形成；免疫荧光示鼠IgG和兔IgG在基底膜呈线性沉积；Scr、BUN、尿蛋白和ACR增加明显。2.抗GBM肾炎模型组中细胞、基因和蛋白三个水平检测到的相关因子均呈规律性表达：FACS示Th17细胞比例先增加后下降,Treg细胞一直处于上升趋势；血清中TGF-β1和IL-17的变化趋势不明显；无论从基因还是蛋白水平E2a的表达均与Th17和Treg细胞特异性转录因子水平相关。3.体外实验显示：在诱导分化后的Th17细胞中,E2a的表达上升,而在Treg细胞中表达下降；用E2a siRNA部分沉默E2a的表达后,细胞更倾向于向Treg细胞分化。结论在抗GBM肾炎小鼠模型中,E2a通过促进促炎细胞Th17分化加重病理损害。