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目的: 1、建立人脂肪间充质干细胞(Human Adipose StemCells，hASCs)的分离、培养、鉴定及冻存、复苏的方法，获得大量高纯度的hASCs，为后续的研究奠定坚实的基础。 2、构建LIF慢病毒载体，转染人脂肪间充质干细胞，获得高表达LIF的人脂肪间充质干细胞。 方法: 1、从抽脂手术患者中得到脂肪组织，Ⅰ型胶原酶消化分离得到hASCs，接种于含10％ FBS的DMEM培养基中培养，并且传代扩增，取第3代生长对数期的细胞，在液氮中冻存6个月后复苏，台盼蓝染色检测细胞存活率，MTT法描绘细胞生长曲线，流式细胞仪检测冻存前后细胞表面分子CD44、CD105、CD29、CD73、CD31、HLA-DR的表达水平。 2、PCR扩增得到LIF基因序列，采用质粒重组技术获得载有LIF基因的重组质粒，重组质粒包装慢病毒，将慢病毒转染人脂肪间充质干细胞后，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，采用流式细胞技术检测慢病毒转染率，RT-PCR及Western blot技术检测LIF的表达水平。 结果: 1、在倒置显微镜下，hASCs大小均一，呈长梭形编织状。复苏后，hASCs存活率可达到(91.25±3.02)％;冻存前后hASCs生长曲线无显著差异，均为“S”形曲线;经过2～3 d的潜伏期后，细胞生长进入增殖期，约7d左右到达平台期。流式细胞术结果显示，hASCs冻存前后，CD44、CD105双阳性细胞率分别为(99.85±0.01)％和(98.06±0.03)％;CD29、CD73双阳性细胞率分别为(92.60±0.03)％和(91.22±0.04))％，CD31阳性细胞率分别为(4.19±0.01)％和(3.83±0.01)％;HLA-DR阳性细胞率分别为(1.02±0.01)％和(1.51±0.01)％。统计学结果提示，细胞冻存前后各指标组间无统计学意义(P＞0.05)。 2、通过PCR技术扩增得到LIF基因序列，并且成功构建带有LIF基因的重组质粒，重组质粒经限制性内切酶双酶切鉴定，得到大小为608 bp左右的条带，大小与LIF基因序列匹配，通过重组质粒转染293T细胞后获得慢病毒颗粒，滴度检测达1×108 TU/ml。慢病毒转染hASC后，流式细胞仪检测慢病毒转染率可达90％。RT-PCR及Western blot结果提示，转染后LIF的表达水平明显升高。 结论: 1、人脂肪间充质干细胞可体外培养和扩增，并且冻存前后，存活率和一般生物学特性无明显变化。 2、携带人LIF基因的慢病毒载体可以有效转染hASCs，并且表达LIF。