F-FETNIM检测人肺腺癌细胞乏氧及再氧合的实验研究

来源 :山东省医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuhuipin1
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背景 乏氧是实体瘤中常见的现象。乏氧可诱导肿瘤细胞表型的变化如p53基因的突变以及Bcl-2的扩增等,从而导致其生物学特性的改变,如放射敏感性的降低[1]。临床常用的放射治疗射线(x线或γ线)为低LET射线,对这类射线,乏氧情况下要得到有氧时的同等生物效应,剂量就需要增加2.5~3倍,这种现象称为氧效应。同时,乏氧肿瘤细胞对某些化疗药物的抵抗性也增加。如果用足够剂量单次照射肿瘤,肿瘤内大多数放射敏感的氧合好的细胞将被杀死,剩下的那些活细胞将是乏氧的。因此,照射后即刻的乏氧分数将会接近100%,然后逐渐下降并接近初始值,这种现象称为再氧合(re-oxygenation)。 再氧合对临床放疗具有重要意义。从原则上讲,应根据不同肿瘤的再氧合程度进行分割照射的调整,但要达这一点,需要解决测定乏氧以及再氧合的技术问题。鉴于乏氧对于肿瘤治疗的重要性,人们一直致力于研究检测乏氧状态的方法。氧电极法是目前公认的直接测定组织乏氧状态的可靠方法,并被认为是组织氧合水平检测的“金标准”,但也存在一些不足:①氧电极法为侵入性方法,只适用于体表肿瘤,其临床应用受到很大限制;②该方法对组织氧平均水平的反映受组织氧合水平的影响,特别是氧合水平低时,检测敏感性差,这在化学法测量时更为明显。③由于肿瘤组织的异质性,虽然该技术采用了多通道穿刺测量,但所得结果仍不能反映肿瘤的整体氧合状态。但目前,氧电极法仍被作为其他组织氧合水平测定方法的常规对照技术。 利用放射性核素如18F、3H、123I、131I、62Cu、99mTc等标记的乏氧组织显影剂进行单光子发射型计算机断层显像(SinglePhotonEmissionComputedTomography,SPECT)或正电子发射断层显像(PositronEmissionTomography,PET)可以对乏氧进行定性和定量检测,具有无创性、定量化、可重复性等特点,可动态地检测肿瘤的整体乏氧状态,是目前乏氧检测研究最为集中的技术之一。但目前还很少利用乏氧显像研究肿瘤再氧合,由于肿瘤的氧合状态是动态的变化过程,充分利用乏氧显像这一无创、重复性强的技术动态检测肿瘤的再氧合,是其较其他乏氧检测技术更为突出的优势。 鉴于上述问题,本研究课题组对乏氧显像剂18F-FETNIM进行了比较全面的动物实验及细胞实验研究,探讨利用乏氧显像研究肿瘤再氧合的可能性,为深入研究肿瘤乏氧以及再氧合开辟新的途径。 目的 利用观察SPC-A-1人肺腺癌细胞系在有氧培养或乏氧培养条件下接受不同剂量X线照射后对18F-FETNIM的摄取变化;同时利用BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌移植瘤模型,观察肿瘤在接受不同剂量X线照射后对上述显像剂的摄取变化。 材料与方法 1、细胞实验:贴壁生长的SPCA-1人肺腺癌细胞,分别进行有氧培养和无氧培养。有氧培养5组采用常规氧气浓度培养(37℃,5%CO2,90%DMEM培养基+10%胎牛血清);乏氧培养组5组于乏氧培养箱中培养(GalaxyR智能型三气培养箱,可控制0.1%~1%的氧气,平衡气体含1%O2,94%N2,5%CO2,37℃,90%DMEM培养基+10%胎牛血清)中培养3小时后,分别接受0,2,4,6,8Gy照射。照射后各培养瓶内加入3.7MBq的FETNIM,分别于加入显像剂后5、30、60、120、180分钟后消化、取样,将所取细胞悬液离心,分别测定细胞部分和培养液部分的放射计数,计算两者比例(Cin/Cout),然后测定活细胞数量(台盼蓝拒染法),计算单细胞平均摄取率,比较细胞在不同培养环境下以及接受不同剂量X线照射后对乏氧显像剂的摄取变化,并绘制时间活性曲线(TAC)。 2、动物实验:荷瘤裸鼠45只,在移植瘤长到1cm后,随机分为3组,每组15只,分别接受0、10、20GyX线照射,照射前后首先采用阳电极测量肿瘤内氧分压,照射后3小时尾静脉注射3.7MBq的FETNIM,分别于注射后30、60、120、180分钟后处死各三只裸鼠,取肿瘤和血液、肌肉标本并分别称重,粉碎后进行放射性计数,计算肿瘤/正常组织的相对摄取比例(靶/非靶)。分别于注射18F-FETNIM后1小时、2小时全身静态后位平面显像。 结果 1、细胞实验 ①乏氧细胞在各时间点的摄取明显高于有氧细胞(P<0.01)且随着时间的推移逐渐增高,在3h时Cin/Cout=7.32±0.74,是有氧组的2.9倍; ②照射后,两组细胞的摄取均高于未照射时(P<0.05),且照射剂量越高,相同时间点摄取增高越大,但并无统计学差异(P>0.05)。 2、动物实验: ①所有荷瘤裸鼠的肿瘤均呈现阳性显像,1h肿瘤开始显像,2h后显像清楚且随着肿瘤的增大显像清晰度增高,CT示肿瘤内有坏死,H&E染色示肿瘤内有坏死组织。 ②在未照射组中,随时间推移,肿瘤对18F-FETNIM的摄取逐渐下降。但肿瘤比正常组织的比值(肿瘤比血液T/B、肿瘤比肌肉T/M)随时间的增加而增加,2小时达最高后逐渐下降。 ③放疗后比未放疗肿瘤在各时间点摄取均增加(F=19.50,P<0.05),且随着放疗剂量的增加而增加,但10Gy与20Gy之间,肿瘤摄取增加无统计学差异(F=6.29,P>0.05)见表5。肿瘤摄取放疗后同放疗前放疗前,随时间的增加而减少,但肿瘤比正常组织比值(肿瘤比血液T/B、肿瘤比肌肉T/M)随时间增加而增加,均显著高于未放疗前(F=43.47,P<0.05)且10Gy放疗组高与20Gy放疗组,但差异无统计学意义(P>0.05) 3、组织内氧分压微电极测量: 肿瘤内氧分压及温度测量,发现肿瘤确实存在乏氧,肿瘤内部氧分压0.28mmHg~30.45mmHg,正常组织氧分压在30.2-40.5mmHg之间。温度随着乏氧程度的增加而增加,肿瘤内部温度为16.39℃~30.30℃,当肿瘤给予放疗后,肿瘤内固定点的氧分压2小时时即发现增高,且随时间的增加而增加 结论 18F-FETNIM在细胞及荷瘤裸鼠肿瘤组织中滞留增加,清除延缓。照射后,细胞摄取增加,肿瘤比正常组织比值(T/M,T/B)增高,表明18F-FETNIM可显示肿瘤组织再氧合的发生。但再氧合发生的时间及程度,仍需进一步实验证明。
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