目的:研究苦豆子总生物碱在体外对宫颈癌Hela细胞的生长、周期、凋亡的影响,初步探讨其作用机制。研究苦豆子总生物碱在体外对宫颈癌Hela细胞迁移、侵袭及转移的影响,简要探讨其作用机制。建立小鼠宫颈癌U14移植瘤模型和人宫颈癌Hela移植瘤模型,观察苦豆子总生物碱在动物体内对宫颈癌生长的抑制作用,进行抗宫颈癌有效性初步筛选、药效学的有效性及可靠性评价,并对苦豆子总生物碱的安全性进行初步评价。方法:1.采用倒置显微镜观察不同浓度的苦豆子总生物碱作用24 h后Hela细胞的形态学变化;MTT法检测不同浓度的苦豆子总生物碱作用24~96 h后Hela细胞的活性;PI单标法检测不同浓度的苦豆子总生物碱作用24 h后细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双标法检测不同浓度的苦豆子总生物碱作用24h后细胞凋亡情况;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达水平的变化。2.采用细胞划痕实验检测苦豆子总生物碱对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;重组基质膜侵袭实验检测苦豆子总生物碱对宫颈癌细胞侵袭转移能力的影响;Western Blot法检测侵袭转移相关蛋白表达水平的变化。3.建立小鼠宫颈癌U14移植瘤模型,小鼠随机分为4组:1)Control组(生理盐水);2)环磷酰胺组(80 mg/kg,ip,实验期间仅在给药第一天给药一次);3)低剂量组(15 mg/kg,ig,1次/d);4)高剂量组45 mg/kg,ig,1次/d);连续给药10 d,最后一次给药次日,小鼠称体重,取静脉血检测血液学指标,脱颈处死小鼠,将肿瘤组织剥离并称重,计算抑瘤率。建立裸鼠宫颈癌Hela移植瘤模型,裸鼠随机分为4组:1)Control组(生理盐水);2)顺铂组(6 mg/kg,ip,1次/7 d);3)低剂量组(15 mg/kg,ig,1次/d);4)高剂量组:(45 mg/kg,ig,1次/d);连续给药21 d,给药期间,注意观察动物一般生命体征变化和肿瘤体积变化,最后一次给药次日,裸鼠称体重,游标卡尺测量瘤体积,取静脉血检测血液学指标,脱颈处死裸鼠,将肿瘤组织剥离并称重,计算抑瘤率。结果:1.随着苦豆子总生物碱浓度的增加和作用时间的延长,苦豆子总生物碱能明显抑制Hela细胞的活性;苦豆子总生物碱能将宫颈癌细胞周期阻滞在G2/M期,并诱导细胞凋亡;苦豆子总生物碱处理后,凋亡相关蛋白Bcl-2、p-NF-κB、p-MAPK表达水平明显下调,而Bax、Cytoehrome C、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP表达水平明显上调。2.苦豆子总生物碱能抑制宫颈癌Hela细胞的迁移和侵袭转移,并呈浓度依赖关系;基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达水平随着苦豆子总生物碱浓度的增加而下调。3.苦豆子总生物碱在实验剂量下对荷瘤小鼠和荷瘤裸鼠无明显毒副作用;苦豆子总生物碱能够有效抑制宫颈癌U14移植瘤和宫颈癌Hela移植瘤的生长,并呈剂量依赖关系。结论:1.苦豆子总生物碱能明显抑制宫颈癌Hela细胞的生长,并呈时间依赖性和浓度依赖性;苦豆子总生物碱能将细胞周期阻滞在G2/M期,其作用机制可能是由于NF-κB的参与从而抑制了某些细胞周期蛋白复合物的活性有关;苦豆子总生物碱可以诱导宫颈癌细胞凋亡,其可能的作用机制是:(1)通过上调Bax的表达水平和下调Bcl-2、NF-κB的表达水平;(2)激活了MAPK信号通路;(3)启动了Cytoehrome C→Caspase-3→PARP通路。2.苦豆子总生物碱能抑制宫颈癌细胞的侵袭转移能力,其机制是通过抑制基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性从而抑制其侵袭转移。3.苦豆子总生物碱在体内能有效抑制宫颈癌移植瘤的生长,且在抑制肿瘤生长的剂量下,未对实验动物产生明显的毒副作用。