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本文研究目的：采用分子流行病学和分子生物学的方法，从高龋无龋儿童口腔菌斑中分离鉴定出变形链球菌和远缘链球菌，进行变形链球菌临床分离株细胞外多糖产量的定量检测并探讨多糖产量与乳牙龋的关系，用PCR-RFLP的方法初步探讨变形链球菌葡糖基转移酶的遗传多态性与乳牙龋的关系。
研究方法：采用随机整群抽样方法，对从化市7间幼儿园所有小班日托幼儿共401名进行乳牙龋病的流行病学调查，从高龋儿童中随机抽取20名儿童作为研究对象，按照年龄性别匹配原则从无龋儿童中抽取20名儿童作为对照。
采集高龋无龋儿童乳磨牙颊面菌斑，应用选择性培养基、形态学和生化鉴定进行临床菌斑中变形链球菌和远缘链球菌的分离和初步鉴定，应用AP-PCR的方法对变形链球菌和远缘链球菌作进一步的鉴定并区分变形链球菌的AP-PCR基因分型。
用蒽酮法测定不同基因型变形链球菌细胞外多糖产量，分析细胞外多糖产量与患龋状况的关系。
选取高龋组合成水不溶性葡聚糖量最高的15株和无龋组合成水不溶性葡聚糖量最低的15株变形链球菌作为葡糖基转移酶基因遗传多态性的研究对象；首先设计引物PCR扩增gtfBC基因片断，然后以三种限制性内切酶MboⅠ、TaqⅠ、HinfⅠ对gtfBC基因片断分别进行酶切，分析酶切产物与患龋状况的关系。
研究结果：从高龋组和无龋组各20名儿童口腔菌斑中分离的120株细菌中，91株变形链球菌(其中高龋组47株，无龋组44株)，9株远缘链球菌，20株既不是变形链球菌也不是远缘链球菌。高龋组变链菌和远缘菌的检出率均高于无龋组，差异有统计学意义。AP-PCR分型结果显示，91株变形链球菌可区分为43种基因型，其中高龋组有31种基因型，无龋组有19种基因型。
细胞外多糖产量定量检测显示，高龋组变形链球菌合成水溶性和水不溶性葡聚糖能力均明显高于无龋组，高龋组个体定植的合成水溶性及水不溶性葡聚糖能力强的菌株所占比例也明显高于无龋组，差异有统计学意义。
PCR-RFLP的结果显示，标准菌株UA159的gtfBC基因片断经TaqⅠ酶切可观察到三条长片断，分别为2800bp、1400bp和180bp，变形链球菌临床分离株中除无龋组有一株临床株与UA159不同外，其余均为此种带型。UA159的MboⅠ酶切图谱可观察到的三条较长片断为650bp、600bp和450bp，所有临床菌株与该标准菌株的酶切图谱未出现差异。UA159的HinfⅠ酶切图谱可观察到的三条长片断为1900bp、1100bp和800bp，临床菌株中则出现两种图谱，一种与UA159的酶切图谱完全一致，另一种的最长片断约为2100bp，其余两条长片段与UA159相同。高龋组15株临床菌株中有5株与UA159酶切图谱一致，无龋组15株临床菌株中有3株与UA159酶切图谱一致。高龋组与无龋组三种酶切图谱的差别没有统计学意义。
研究结论：
1.AP-PCR可以简便准确地鉴别变链菌和远缘菌，用该法检测发现高龋儿童变链菌和远缘菌检出率均明显高于无龋儿童。
2.高龋组变链菌合成水溶性与水不溶性葡聚糖能力均高于无龋组，提示乳牙龋的发生与变链菌的细胞外多糖合成能力密切相关。
3.三种限制性内切酶(MboⅠ、TaqⅠ、HinfⅠ)对高龋无龋儿童变链菌临床分离株的gtfBC基因进行酶切，HinfⅠ的酶切图谱在两组儿童间存在差别，但差别没有统计学意义。针对gtfBC基因遗传多态性的研究方法以及变链菌gtf基因遗传多态性与乳牙龋的关系有待于进一步的研究。