骨髓间充质干细胞复苏过早衰老髓核细胞的初步研究

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目的:探讨体外非接触共培养条件下兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)鸡尾酒效应对氧化应激诱导过早衰老髓核细胞(nucleus pulposuscells,NPCs)的复苏作用。   方法:体外分离、培养兔MSCs和NPCs,鉴定细胞表型。取P3代MSCs和原代NPCs非接触共培养,并分为:A组单纯NPCs培养,不行过早衰老诱导;B组MSCs与NPCs细胞比例1:1共培养;C组MSCs与NPCs细胞比例1:3共培养;D组单纯NPCs培养,行过早衰老诱导;B、C、D三组用50μmol/L双氧水处理NPCs诱导其过早衰老。共培养后第3d、6d,通过SA-β-gal的细胞化学染色检测各组NPCs的细胞老化率,半定量RT-PCR检测聚集蛋白聚糖Aggrecan及Ⅱ型胶原的相对转录水平。   结果:P3代MSCs高表达CD44,低表达CD34、CD45;NPCs于胞质内表达Ⅱ型胶原和聚集蛋白多糖。共培养3d后,B组(7.62±0.04%)和C组(7.24±0.11%)NPCs的细胞老化率均已低于D组(11.3±0.48%),而高于A组(0.80±0.07%),差异有统计学意义(P<0.05);并随着培养时间的延长,C组的细胞老化率开始低于B组(P<0.05)。共培养后A组、B组和C组NPCs的Aggrecan、Ⅱ型胶原相对转录水平均高于D组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。   结论:在体外非接触共培养体系下,MSCs可通过旁分泌的鸡尾酒效应能够在一定程度上复苏氧化应激诱导的NPCs过早衰老。
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