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神经干细胞是一种可以分化为神经元,胶质细胞和少突胶质细胞并且可以自我更新以补充大脑细胞的细胞。神经干细胞分化机制的研究对于阐释神经发育、基因调控具有重要理论意义,对于神经系统疾病治疗、细胞移植等具有潜在临床实用价值。Rho蛋白家族成员通过调节细胞骨架肌动蛋白的重组来调节细胞的多种功能。比如:细胞形态改变,细胞聚合和细胞间粘连。Rho蛋白家族成员有两种互变形式:GDP结合的失活形式和GTP结合的激活形式,激活状态的Rho蛋白将和其下游效应因子作用而行使其细胞功能。两种调节因子可以调节Rho蛋白的活性:GDP/GTP交换因子(GEPs),促进GDP/GTP交换反应;GDP解离抑制因子(GDIs),抑制GDP/GTP交换反应。Rho-GDIγ是Rho-GDI家族的成员,只在脑和胰腺中高表达。
为了研究神经干细胞分化基因调控网络,通过基因表达谱分析发现神经干细胞分化过程与G13信号通路密切相关;生物信息学方法推导出了基因表达和调控的信号通路并且揭示Rho-GDIγ在神经干细胞分化网络中的重要作用。为了研究Rho-GDIγ基因在神经干细胞分化过程中的作用,构建了3个siRNA沉默载体,实施了基因沉默。Real Time PCR揭示了Rho-GDIγ基因的有效沉默(下调6.87倍)以及该基因下调导致的相关基因(RhoA,Cdc42,Rac1,Limk2和N-WASP)的表达水平变化。统计分析表明:RhoA,Cdc42,Limk2和N-WASP的转录被显著下调,Rac1有一些上调;Rho-GDIγ基因的下调使神经干细胞在形态上变化显著,免疫组化进一步显示其向神经元特性细胞分化的趋势。
本研究从分子水平、细胞水平探讨了Rho-GDIγ在神经干细胞分化过程的作用,为从网络层面研究神经干细胞的分化提供了新的借鉴与积累。