中国古老月季是指出现于1867年以前的原产中国的多季开花的月季花(Rosa chinensis)的品种,统计至2006年我国现存100多个古老月季品种。中国古老月季具有很高的观赏、文化、经济价值,同时也是重要的基因资源,因此保存该类资源非常重要。建立多层次的保存体系是提高种质资源保存安全性的重要措施。组织培养和超低温保存是种质资源离体保存的重要技术,后者由于可以长期保存种质资源,近年受到更多的重视。目前中国古老月季主要保存于种质圃中。本文以13个中国古老月季品种为材料研究其离体保存技术,分别研究了中国古老月季品种的组织培养离体保存技术、‘月月粉’茎尖的常规玻璃化法超低温保存技术程序及该程序在其他中国古老月季品种茎尖超低温保存中的适用性。结果如下：(1)建立了11个中国古老月季品种的组织培养离体保存技术体系。在春季(4-5月份)以各品种带腋芽茎段为外植体,初代培养基为不添加激素的MS培养基；增殖培养基为MS+6-BA1.5mg-L-1+NAA0.1mg-L"1,13个品种增殖系数从1.7～3.8不等；生根培养基为1/2MS+IBA0.1mg-L-1,11个品种生根率均达到70%以上；将试管苗移栽至蛭石：草炭：珍珠岩=5：4：1的基质中,11个品种的移栽成活率均达60%以上。综上可知该体系适用性良好,11个品种可实现再生。(2)建立了中国古老月季品种‘月月粉’茎尖常规玻璃化法超低温保存技术体系。将‘月月粉’试管苗剪为5mm左右的带顶芽小苗,接入含0.3mol·L-1蔗糖的预培养基并放入4℃冰箱中黑暗条件下冷锻炼12d；切取大小约1.5～2.0mm,带3～4片叶原基的茎尖放入Loading溶液中在室温下处理20min,然后在0℃下用PVS2溶液处理60min后迅速投入液氮,冻存时间至少1h；从液氮罐中取出迅速在37℃水浴中化冻1min,使用Unloading溶液处理室温下震荡洗涤2次,每次10min。经TTC染色检测冻存后的茎尖存活率最高为88.4%。将洗涤后的茎尖接入不添加激素的MS培养基中,经暗培养14d后转入正常光下培养,恢复生长率最高为43.3%。(3)进行了‘月月粉’茎尖三种玻璃化超低温保存方法的比较研究。以TTC法检测存活率,常规玻璃化法、包埋玻璃化法和滴冻玻璃化法茎尖冻存后的存活率分别为88.4%、0%和93.0%。常规玻璃化法和滴冻玻璃化法存活率无显著差异,且常规玻璃化法操作简便,因此常规玻璃化法更适合中国古老月季品种‘月月粉’茎尖的超低温保存。(4)为探索液氮保存对于茎尖组织结构的影响,对‘月月粉’超低温保存前后的茎尖使用石蜡切片法进行了组织结构观察。结果表明超低温保存前后顶端分生组织(约8-10层细胞,厚度0.05mm左右)细胞及第1-2片叶原基细胞无明显差别；而超低温保存后,距离顶端分生组织较远的叶原基及顶端分生组织以下的部分组织结构破坏严重,质壁分离明显或出现原生质体破裂、细胞壁变形或破裂的现象。(5)检测了‘月月粉’茎尖常规玻璃化法超低温保存程序在其他中国古老月季品种上的适用性。将该程序应用于其他9个品种,经TTC法检测所得存活率从73.1%～97.0%不等,其中7个品种的恢复生长率为26.7%～45.6%不等,适用性良好。本文建立了中国古老月季的试管离体保存技术体系,并成功建立了中国古老月季品种‘月月粉’的常规玻璃化法超低温保存技术程序,该程序在其他9个中国古老月季品种中适用性良好。本研究初步实现了建立多层次保存中国古老月季种质资源的目标,并为建立中国古老月季品种茎尖超低温保存库提供了良好的基础。