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猪传染性疾病给我国的养殖业带来巨大的危害。传统的血清学检测方法难以了解猪群的早期发病情况,同时也无法区分抗体性质,影响了诊断传染病的准确性。随着我国规模化养猪业的快速发展,深入研究这些疾病免疫特点,提高免疫监测和诊断能力,对预防该类传染性疾病已迫在眉睫。研制猪免疫球蛋白的单克隆抗体,对于进一步研究猪传染性疾病具有十分重要的现实意义。本文主要研究了抗猪免疫球蛋白单克隆抗体的制备和鉴定。首先,采用饱和硫酸铵盐析和Sephadex G-200柱层析法从猪血清中获得IgM和IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化后的IgM和IgG达到了电泳纯。Folin-酚法测定IgM和IgG浓度,分别为0.7mg/mL和2mg/mL。其次,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,两组方法分别建立并优化后得出以下最佳反应条件。猪IgM包被的间接ELISA筛选方法:抗原包被量为0.25μg/mL,阳性和阴性对照血清稀释度为1:2000,酶标抗体羊抗鼠IgG-HRP的稀释度为1:20000;猪IgG包被的间接ELISA筛选方法:抗原包被量为0.1μg/mL,阳性和阴性对照血清稀释度为1:2000,酶标抗体羊抗鼠IgG-HRP的稀释度为1:20000。最后,用纯化后的猪IgG,采用常规免疫法免疫6-8周龄雌性BABL/c小鼠。取三次免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按10:1混合,用1mL 50% PEG3000进行细胞融合,10-15天后初次检测。试验中共融合两次,两次融合率分别为84.4%和75%,初检阳性率分别为13%和4.5%。经两次亚克隆后,共获得两株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为C11和G3。两株杂交瘤细胞经过体外多次传代培养后,仍能分泌高效价的抗体,且细胞上清效价均稳定在1:64～128之间。用12周龄以上的BABL/c小鼠大量制备单抗腹水,G3株小鼠腹水单抗ELISA效价为1:12800以上。经HBT Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit鉴定,C11细胞株为IgM类,κ型。分别用IgM和IgG抗原包被的间接ELISA法检测G3株细胞上清和小鼠腹水效价,两种方法检测结果相近。Weston-Blotting试验证实二株细胞均为分泌针对猪Ig轻链抗体的杂交瘤细胞株,与间接ELISA法的检测结果相符。