聚多巴胺涂层开管柱的制备及其在蛋白分离中的应用

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分离和检测食品中的蛋白是食品产业中的一个重要方面。高效液相色谱和毛细管电泳已经被应用于分离蛋白。与高效液相色谱相比毛细管电泳因为它低的进样量和溶剂消耗量已经被广泛用来分离蛋白,但用裸柱分蛋白时,由于蛋白和毛细管内壁间存在库仑力和疏水作用,使得蛋白会强烈地吸附在毛细管内壁上,从而导致蛋白分离效率的降低、重现性差、峰形展宽等问题,严重制约了毛细管电泳在该领域的应用。  毛细管电色谱(CEC)是一种结合了毛细管电泳的高效性和高效液相色谱选择性的新型微分离技术。开管柱毛细管电色谱(OT-CEC)是CEC的一个重要分支,OT-CEC主要通过涂布、键合和溶胶-凝胶等方法在柱内制备薄层固定相,避免了塞子效应和气泡的产生等问题,且制备过程简单、柱效高。  目前,最有效且应用最广泛的抑制蛋白质吸附的方法是管壁涂层化。受到多巴胺在碱性条件下容易自聚和聚多巴胺强黏附性质的启发,在本论文中,开发了一种简易和经济的制备聚多巴胺涂层开管柱方法,在该方法中,过硫酸铵作为氧气的来源去诱导和促进多巴胺自聚形成聚多巴胺涂层。与裸柱相比,制备的聚多巴胺涂层开管柱的电渗流方向和大小能够通过改变背景缓冲溶液的pH来调控,因为聚多巴胺涂层上存在氨基和酚羟基等官能团。聚多巴胺涂层开管柱的表面形态通过电镜来表征,涂层的厚度是160 nm。开管柱的性能通过分离蛋白来评价。分离蛋白迁移时间的相对标准偏差小于3.5%。除此之外,所制备的聚多巴胺涂层开管柱能有效地分离鸡蛋清和牛奶中的蛋白。
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