甲型流感病毒核蛋白融合基因的构建与表达以及siRNA抑制作用的研究

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目的:甲型流感病毒核蛋白NP融合基因的构建及表达;检测特异siRNA在MDCK细胞中对NP融合基因表达的抑制作用。方法:PCR扩增甲型流感病毒核蛋白NP基因片段,运用三种不同的方法构建NP与绿色荧光蛋白的融合基因pEGFP-N1-NP,获取成功构建含绿色荧光蛋白融合基因的方法;利用脂质体介导将融合基因表达质粒载体pEGFP-N1-NP导入MDCK细胞;设计并合成针对甲型流感病毒多种亚型的特异性siRNA,并与融合基因pEGFP-N1-NP共转染MDCK细胞,通过荧光显微镜、免疫荧光、Western blot等方法检测NP基因的表达以及siRNA对NP基因表达的抑制作用,筛选出对NP基因表达能有效抑制的siRNA.结果:通过构建甲型流感病毒核蛋白NP融合基因三种方法的比较研究,成功获取了构建含绿色荧光蛋白融合基因的方法;荧光显微镜、免疫荧光、Western blot等方法检测NP基因在MDCK细胞中的表达,所设计的3对特异siRNA均能有效抑制NP基因的表达。结论:甲型流感病毒核蛋白融合基因的成功构建与表达以及特异性siRNA对核蛋白融合基因表达的有效抑制,为进一步在多亚型流感病毒株中检测siRNA的抑制作用、深入探索流感病毒致病机制、研制能预防甲型流感病毒多亚型同时暴发的通用疫苗及抗病毒药物奠定了实验基础。
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