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细胞自噬控制着细胞内蛋白质和细胞器的降解，对细胞生长及稳态维持非常重要。自噬关键调控因子Beclin1是一个重要的抑癌基因，在肿瘤的发生、发展中起着重要作用。宫颈癌的组织类型主要有鳞状细胞癌和腺癌两种，临床上前者较为常见。SiHa细胞属于鳞状细胞癌，Hela细胞属于腺癌，大量的研究关注Beclin1与Hela细胞的关系，然而Beclin1对SiHa细胞的影响未见报道。在克隆Beclin1基因时发现其一种新的转录本，故本研究对二者编码的蛋白质进行原核表达和纯化。 目的:克隆Beclin1基因及其新的转录本DEL-E8-E10，利用镍柱亲和层新纯化Beclin1和DEL-E8-E10。 方法：1、Beclin1基因及DEL-E8-E10的克隆 以Beclin1基因的编码序列（BC010276）作为模板设计引物，以SiHa细胞的cDNA为模板，进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）。 2、Beclin1及DEL-E8-E10的原核表达 用限制性内切酶BamH I和Sal I对Beclin1、DEL-E8-E10和pET32a进行酶切，切胶回收，用T4DNA连接酶将Beclin1或DEL-E8-E10与线性化的载体pET32a连接起来，转化到E.coli Top10，过夜培养，挑选并培养单克隆，提质粒，用XhoI筛选重组质粒pET32a-Beclin1和pET32a-DEL-E8-E10，酶切阳性的质粒进行DNA测序。 将质粒pET32a-Beclin1和pET32a-DEL-E8-E10转化大肠杆菌BL21(DE3)，挑取单克隆，37℃培养16h。以适当的比例进行转接，37℃继续培养使OD600达到0.6，加入IPTG使得终浓度为12.5μM、25μM、50μM和100μM，25℃诱导5h，取样，SDS-PAGE进行鉴定。 3、Beclin1及DEL-E8-E10的纯化 将大量诱导的菌体进行超声波破碎，离心，取上清与平衡好的镍柱混合，4℃孵育2h，将混合液加入到纯化柱中，用大于10体积的PBS洗涤，加入浓度梯度的咪唑进行洗脱，得到融合蛋白Beclin1和DEL-E8-E10。 结果：1、克隆到Beclin1基因及其新的转录本DEL-E8-E10，序列比对的结果表明DEL-E8-E10与Beclin1的相似度为84%。DEL-E8-E10的氨基酸序列较Beclin1缺失第8个外显子和第10个外显子； 2、在IPTG的浓度为25μM时，两个重组载体的表达量最大，且均为可溶性蛋白； 3、用镍柱初步纯化出融合蛋白Beclin1和DEL-E8-E10。 结论：克隆出Beclin1和DEL-E8-E10基因，融合蛋白Beclin1及DEL-E8-E10在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达和纯化。