拟南芥AHL13蛋白与多聚腺苷二磷酸核糖修饰相互作用调节植物免疫的机理

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植物在生长过程中会受到各种病原的侵染,在进化中形成了识别病原并建立抗病反应的先天免疫系统。在此系统中,植物细胞核内发生的响应病原入侵的免疫基因转录激活,是整个防御机制建立的关键。本研究发现PARP2正向调节拟南芥中免疫基因的诱导表达,其催化的多聚腺苷二磷酸核糖化修饰(PARylation)是拟南芥先天免疫的重要调节机制。为研究其潜在的分子机理,本研究通过酵母双杂实验筛选到了与PARP2互作的蛋白,其中一个为AT-hook motif nuclear localization(AHL)蛋白,AHL13。AHL蛋白可识别DNA小沟,通过染色体结构重调节转录,在植物中AHL家族成员可调控生长发育以及对环境的应答:如花器官形成、花粉壁建成、叶片发育、下胚轴生长、根步维管束分化、激素应答等,但是目前拟南芥AHL家族29个成员中尚有约一半的蛋白功能未知,而且对AHL蛋白潜在的免疫功能研究相对较少。本研究对AHL13以及它与PARP2的相互作用在拟南芥抗病中的功能和生物学意义进行了深入研究。经GFP融合蛋白亚细胞定位发现AHL13与PARP2都定位于细胞核,而且其相互作用得到了免疫共沉淀、双分子荧光互补以及蛋白质体外结合等实验的验证。进一步通过分析AHL13的T-DNA插入突变体以及过表达转基因株系,我们发现AHL13对细菌病原丁香假单胞菌的抗性以及免疫基因的表达有抑制作用。体外实验发现AHL13与PARyation形成的多聚腺苷二磷酸核糖侧链(PAR)有相互作用,而且PAR可以抑制AHL13的DNA合,也初步检测到了PARP2对AHL13的PARylation修饰,这些生化互作可能是AHL13与PARP2催化PARylation之间相互拮抗共同调节转录的机理。本研究不仅发现了拟南芥中对免疫基因及抗病起负调控的新基因与功能,而且可揭示PARylation调控植物免疫基因转录过程的新机理。
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