论文部分内容阅读
第一部分:188Re标记锡硫胶体的方法学研究目的建立188Re标记锡硫胶体的方法,并研究其稳定性和颗粒大小。方法1.标记药盒法:（1）改变加入硫胶体药盒（SC kit,供99mTc标记用）的188Re淋洗液体积,其余步骤按说明书,进行188Re标记硫胶体的预实验;（2）改变标记条件,在药盒内单独依序加入0～1mlNa2S2O3.5H2O（8mg/ml）和SnCl2.2H2O（20mg/ml）进行188Re标记实验。2.自制法:按照SC kit成分配制试剂,其他标记条件不变,单一依序改变以下实验条件:①改变Na2EDTA.2H2O（4.6mg/ml）体积从0ml至1.25ml;②改变Na2S2O3.5H2O（8mg/ml）体积从0～1.25ml;③改变SnCl2.2H2O（20mg/ml）体积从0～1ml;④加入淋洗液后以浓盐酸、氢氧化钠或磷酸盐缓冲液调节PH值;⑤改变反应时煮沸时间;⑥在不同时间点分别测定标记率。3.测定标记产物的稳定性和放射性胶体粒子直径大小。结果1.188Re标记锡硫胶体的最佳标记条件:（1）药盒法:SC kit中加入0.5mlSnCl2.2H2O（20mg/ml）、0.25mlNa2S2O3.5H2O（8mg/ml）。（2）自制法:整个反应体系中依序加入18.1mg明胶、0.5mlNa2EDTA.2H2O、0.5mlNa2S2O3.5H2O、0.5mlSnCl2.2H2O,并加入浓盐酸将煮沸前反应体系PH调至l.0,煮沸时间为20min。2.药盒法和自制法标记产物的的最高标记率分别为（99.79±0.31）%、（99.81±0.06）%:两者差异无统计学意义,,标记物在生理盐水中放置72h后放化纯仍为（93.23±0.64）%;胶体颗粒的直径范围分别为（10.83±6.60）μm（D10）,（44.91±14.46）μm（D50）,（235.29±126.61）μm（D90）。结论188Re标记锡硫胶体方法简便、标记率高,标记物稳定性良好,能产生较大颗粒的放射性胶体粒子。第二部分:188Re标记锡硫胶体在荷瘤动物体内分布的实验研究目的观察188Re标记锡硫胶体在荷瘤动物体内的生物学分布,探讨其用于实体肿瘤放射治疗的可行性。方法按第一部分方法,制备高标记率,稳定有效的188Re-SnSC。两种途径观察药物分布:1经皮肝动脉灌注:荷VX2肝肿瘤兔模型在DSA下经皮肝动脉分别注入约0.5ml（74～185MBq） 188Re-SnSC（2组,n=3）和游离188ReO4-（1组,n=3）;2直接瘤内注射:荷人胰腺癌裸鼠,瘤体中心部位分别直接瘤内注射0.05ml（0.05～0.1mCi） 188Re-SnSC（7组,n=4）和游离188ReO4-（5组,n=4）。以上两种肿瘤动物模型均在规定时间点采集SPECT图像,并处死动物取出肿瘤、肝脏、血液等组织称重并计算每克组织百分注射计量（%ID/g）。结果1经皮肝动脉灌注组:注射188Re-SnSC和游离188ReO4-1h后,肿瘤组织%ID/g为（23.342±11.452）%和（0.713±0.479）%,肿瘤与肝脏的%ID/g之比分别为70.887±19.578、2.280±1.155;注射188Re-SnSC后24h,肿瘤组织%ID/g和肿瘤与肝脏的%ID/g之比分别为（8.176±6.836）%、17.419±13.957。2直接瘤内注射组:瘤内注射188Re-SnSC后0.5h、1h、4h、24h,肿瘤组织的%ID/g分别为（89.53±18.76）%、（104.31±36.72）%、（105.76±39.30）%、（86.22±18.47）%,注射188Re-SnSC后7d,肿瘤组织的%ID/g为（0.323±0.072）%;瘤内注射游离188ReO4-后0.5h、1h、4h、24h,肿瘤组织的%ID/g分别为（17.72±2.46）%、（10.53±3.57）%、（6.24±2.59）%、（0.026±0.003）%。结论188Re标记锡硫胶体动脉和瘤内注射后主要聚集在肿瘤组织,滞留时间长,有望用于实体肿瘤的放射性核素治疗。第三部分:188Re标记锡硫胶体对胰腺癌细胞的杀伤效应目的观察188Re标记锡硫胶体对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法1按第一部分方法,制备高标记率,稳定有效的188Re-SnSC,标记完成后室温下放置30min冷却后备用。2每孔体积200μl,1×104个胰腺癌细胞单个细胞悬液接种于96孔培养板中;188Re-SnSC组按不加药物、0.01、0.025、0.05 mCi分为4列,188ReO4-组按不加药物、0.01、0.05mCi分为三列,每列8个复孔,每天一块培养板,共7块板。MTT法测每列各孔的光吸收值（A）,绘制细胞生长曲线,计算药物对细胞的抑制率。结果在1～5天内188Re-SnSC对细胞的抑制作用随放射性药物剂量和照射时间的增加而增大。0.05mCi 188Re-SnSC组加药后1、3、5、7天抑制率分别为（33.70±3.74）%、（89.80±1.21）%、（97.43±0.59）%、（92.20±1.18）%,最大抑制率可达（98.09±0.58）%。结论在细胞实验中,188Re-SnSC和188ReO4-均对胰腺癌生长有明显的抑制。