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第一部分:临床肺癌患者肿瘤组织及癌旁健康组织、肺癌患者以及健康人血液样本中UCA1/microRNA-193a/HMGB1通路表达情况的研究背景:随着分子生物学研究的不断深入,根据各种分子标志物表达的不同将NSCLC进行分子表型分类,并以与肿瘤发生、发展相关的驱动性基因为靶点,研发新的药物,进行有针对性的个体化分子靶向精准治疗在晚期NSCLC的治疗上取得了显著的临床进展。长非编码RNA人类尿路上皮癌相关RNA1-UCA1在多种肿瘤中表达异常并促进癌症的发生、发展,是一个针对人类各种肿瘤诊断和实施肿瘤效应的新的潜在的生物标志物,但UCA1在肺癌中致癌作用的机制还不甚清楚。研究长非编码RNA-UCA1在肺癌的发生、发展中的功能及其作用机制,必将对肺癌的预防、诊断、治疗及预后产生积极的作用。目的:检测UCA1、microRNA-193a和HMGB1在肺癌患者和正常血清、组织样本中的表达水平,并分析其相关性及临床意义。方法:1)用实时定量PCR的方法检测肺癌患者和正常人血清中UCA1、microRNA-193a和HMGB1的表达情况;2)用实时定量PCR的方法检测肺癌患者癌组织样本以及癌旁健康组织中UCA1、microRNA-193a 和 HMGB1 的表达情况;3)用免疫组化技术检测肺癌患者癌组织样本以及癌旁健康组织中HMGB1的表达情况,分析二者的相关性及临床意义;4)用蛋白免疫印迹技术检测肺癌患者癌组织样本以及癌旁健康组织中HMGB1的表达情况,分析二者的相关性及临床意义。结果:1)UCA1在肺癌患者的血液中的表达水平比健康人的血液中高;microRNA-193a在肺癌患者的血液中的表达水平比健康人的血液中低;HMGB1在肺癌患者的血液中的表达水平比健康人的血液中高;2)在15例病人中,有14例病人的UCA1在癌组织中的RNA表达水平比相应的癌旁健康组织中高;有13例病人的microRNA-193a在癌组织中的表达水平比相应的癌旁健康组织中低;有13例病人的癌组织中的HMGB1的蛋白表达水平比相应的癌旁健康组织中高;3)在15例病人中,有13例病人的癌组织中的HMGB1的蛋白表达水平比相应的癌旁健康组织中高;4)在15例病人中,有13例病人的癌组织中HMGB1蛋白的表达水平比相应的癌旁健康组织中高。结论:UCA1/microRNA-193a/HMGB1通路各组分表达量之间的关系可能具有重要的临床应用价值。第二部分:UCA1对肺癌细胞生物学行为的影响及其作用机制的研究背景:肺癌是引起死亡的主要疾病之一。研究表明长非编码RNA在多种肿瘤中异常表达并且发挥关键作用。尿路上皮癌相关基因1(UCA1)在多种人类癌症中发挥致癌作用,是一种潜在的新型肿瘤生物标志物,具有用于肿瘤诊断的潜能。然而,UCA1在肺癌中致癌作用的分子机制仍有待进一步的研究。目的:1)研究UCA1的表达与肺癌细胞增殖、迁移相关的机制;2)检测肺癌细胞中UCA1和miR-193a以及HMGB1的表达以及相互关系;3)阐明UCA1发挥作用的机制,揭示UCA1、miR-193a以及HMGB1在肺癌发生发展中潜在的临床应用价值作用。研究方法:1)肺癌细胞系SKMES-1和H520中转染UCA1的小干扰RNA,然后通过qPCR实验检测UCA1、miR-193a以及HMGB1的表达情况;Western blots实验检测HMGB1的表达情况;CCK8实验检测细胞活力的变化;迁移小室实验检测细胞迁移能力的变化;2)双荧光素酶报告基因检测UCA1与miR-193a、miR-193a和HMGB1之间的结合;3)肺癌细胞系SKMES-1和H520中转染miR-193a的模拟物以及抑制剂,然后通过qPCR以及western blots实验检测HMGB1的表达;CCK8实验检测细胞活力的变化;迁移小室实验检测细胞迁移能力的变化;4)肺癌细胞系SKMES-1和H520中转染HMGB1的小干扰RNA,然后通过qPCR以及western blots实验检测HMGB1的表达;CCK8实验检测细胞活力的变化;迁移小室实验检测细胞迁移能力的变化;5)在肺癌细胞系SKMES-1和H520中转染干扰UCA1/miR-193a/HMGB1通路,然后通过qPCR以及western blots实验检测HMGB1的表达;CCK8实验检测细胞活力的变化;迁移小室实验检测细胞迁移能力的变化。结果:1)UCA1的小干扰RNA能够在肺癌细胞中有效沉默UCA1的表达,抑制UCA1能够抑制肺癌细胞系SKMES-1和H520的细胞增殖和迁移;2)双荧光素酶报告基因检测UCA1与miR-193a、miR-193a和HMGB1之间具有结合作用;3)抑制UCA1的表达促进miR-193a表达,miR-193a具有抗肿瘤作用:4)此外,我们发现miR-193a通过调节HMGB1表达在肺癌中发挥作用,我们还发现HMGB1的过表达可以恢复降低UCA1所诱导的细胞增殖和迁移的抑制;5)调控UCA1/miR-193a/HMGB1通路能够影响肺癌细胞的生长与迁移。结论:总之,我们的研究表明UCA1在肺癌中发挥癌基因活性,并通过作为“海绵”,与HMGB1竞争性结合miR-193a,从而上调HMGB1的表达。