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研究目的1.筛选肝癌中低表达,与代谢相关的miRNA:miR-142-3p;2.探讨miR-142-3p在肝癌有氧糖酵解和增殖中的作用;3.探讨miR-142-3p调控肝癌有氧糖酵解和增殖的分子机制。研究内容和方法1.筛选肝癌中低表达,与代谢相关的miRNA。1)利用TCGA数据库以及GEO数据集GSE 22058,GSE 54751,GSE 21362和GSE 12717筛选在肝癌中低表达的miRNA。2)通过对交集的miRNA进行通路以及功能分析,筛选与能量代谢相关的 miRNA2.miR-142-3p对肝癌细胞有氧糖酵解和增殖的影响。1)利用miR-142-3p的mimic转染肝癌细胞株SK-Hep-1和Huh-7来过表达miR-142-3p;2)过表达miR-142-3p后,检测培养基中葡萄糖消耗和乳酸产生以观察有氧糖酵解活性;3)过表达miR-142-3p后,EDU实验和CCK-8实验检测细胞增殖能力。3.miR-142-3p调控有氧糖酵解和增殖的分子机制。1)利用 RNA22(http://cbcsrv.watson.ibm.com/rna22.html)预测 miR-142-3p的靶基因LDHA;2.)利用Western blot检测miR-142-3p靶基因的蛋白水平。3)利用双荧光素酶实验鉴定miR-142-3p直接作用于靶基因LDHA;4)通过Rescue实验证明miR-142-3p通过LDHA调控有氧糖酵解和增殖。结果1.miR-142-3p在肝癌中低表达,与能量代谢有显著相关性。1)通过生物信息学分析,在TCGA数据库以及GEO数据集GSE22058,GSE 54751,GSE 21362 和 GSE 12717 均下调的 miRNA 有:hsa-miR-424;hsa-miR-195;hsa-let-7c;hsa-miR-130a;hsa-miR-142-3p;hsa-miR-29c;hsa-miR-10a;hsa-miR-99a;hsa-miR-3 78。2)通过对每个miRNA靶基因的生物功能通路分析,只有miR-142-3p和miR-195与能量代谢显著相关。2.miR-142-3p抑制肝癌细胞有氧糖酵解和增殖。1)与scramble相比,过表达miR-142-3p后肝癌细胞株SK-Hep-1和Huh-7糖酵解活性减弱。2)与scramble相比,过表达miR-142-3p后肝癌细胞增殖受到抑制。3.miR-142-3p直接靶向LDHA下调其表达,进而抑制了肝癌细胞有氧糖酵解和增殖。1)miR-142-3p可以下调LDHA的蛋白水平,双荧光素酶实验表明miR-142-3p可以直接靶向LDHA;2)过表达miR-142-3p的同时过表达LDHA,检测肝癌细胞有氧糖酵解和增殖,可以起到rescue作用。结论miR-142-3p在肝癌组织中低表达,并且与能量代谢有明显相关性。过表达miR-142-3p可抑制肝癌细胞有氧糖酵解和增殖;机制上,miR-142-3p直接靶向LDHA下调其表达,进而抑制了肝癌细胞有氧糖酵解和增殖。