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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)是能够引起人医临床和兽医临床上的多重耐药病原菌,被称为“超级细菌”;cfr基因是能够介导噁唑烷酮类药物、林可酰胺类药物、截短侧耳素类药物、氯霉素类药物以及链阳菌素A这五大类抗菌药同时耐药的多重耐药基因。MRSA菌株经常和cfr基因一起出现在动物、人及其环境中,是近几年来的研究热点,也是科研工作者高度关注的对象。本文主要针对128株从动物源以及人源分离到的MRSA菌株进行耐药性和分子分型的分析,着重分析cfr阳性MRSA菌株的传播机制和基因环境,重点比较cfr阳性MRSA菌株和cfr阴性MRSA菌株在耐药率、耐药基因的检测情况以及分子分型等方面的差异。本文主要是以从中国广东、河南、河北、福建、山东以及湖南等省份中的动物环境以及人身上采集分离的128株MRSA菌株为研究对象,其中cfr阳性MRSA菌株是重点研究对象。采用PCR方法检测128株MRSA菌株中携带cfr基因及其它耐药基因的情况。结果表明128株MRSA中共检出20株MRSA携带cfr基因,其他20种耐药基因结果显示,fexA,aadAI和tet(L)的阳性检出率最高,均大于92%;其次是ermC(85.16%),aph(4’)-Ia(84.37%),ereB(76.56%)和tetM(72.65%)。ermA(33.59%)和ermB(11.71%)的检出率相对较低,除此之外,在128株MRSA中还检出43株optrA基因,检出率是33.59%株。有趣的是,其它耐药基因在cfr阳性菌株的检测率比cfr阴性菌株高,尤其是optrA,ereB,aac(3’)-IIc和aph(3’)-IV等基因,存在着显著差异。另外在这20株cfr阳性MRSA中,同时携带fexA和ermC基因;此外,分别有18和11株cfr阳性MRSA菌株是携带optrA和ermA基因。采用二倍琼脂稀释法和微量肉汤稀释法测定128株MRSA菌株对常见的15种抗菌药物的敏感性。结果显示大部分菌株对红霉素、克林霉素、四环素、阿奇霉素、泰乐菌素、环丙沙星、氨苄西林、头孢噻肟、庆大霉素以及氟苯尼考的耐药率大于80%,而对甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(43.75%),利福平(21.09%)的耐药率相对较低,所有的MRSA菌株均对万古霉素、利奈唑胺以及达托霉素敏感。对于20株cfr阳性MRSA菌株,耐药率大于80%的药物共有10种,耐药谱型有15种,呈现多重耐药的现象。值得注意的是,除了利奈唑胺,万古霉素以及达托霉素,cfr阳性MRSA菌株的对大部分抗生素的耐药率均高于cfr阴性MRSA菌株。虽然所有的cfr阳性MRSA菌株和cfr阴性MRSA菌株对利奈唑胺均敏感,但是受试菌株的MIC高于质控菌株29213的菌株中,cfr阳性MRSA菌株所占的比例大于cfr阴性MRSA菌株(40%vs 6.5%,)。通过多位点序列分型(MLST)和spa分型方法对128株MRSA进行分子分型。经过测序和网上比对结果显示,在128株MRSA菌株中共出现8种ST型,其中ST9(105/128,82.0%)型占主导;spa分型中有7种不同的类型,其中t899(103/128,80.5%)占主导,结合两种分型,共有12种不同的ST-spa谱型,其中ST9-t899(101/128,78.9%)是最主要的谱型,其次是ST764-t1084(8/128,6.3%)。在cfr阳性MRSA菌中,有3种不同的ST型和4种不同的spa型,其中ST9(17/20,85%)和t899(15/20,75%)分别占主导ST型和spa型,共有4不同的ST-spa谱型,同时ST9-t899(15/20,75%)也是cfr阳性菌株中的主要类型。根据菌株差异及背景信息分别对20株cfr阳性MRSA和挑出10株cfr阴性MRSA进行PFGE分析。结果显示,30株MRSA菌株均分型成功,以100%来界定,有30种不同的种族进化群(I~XXX型)。总的来看,cfr阳性MRSA菌株的遗传背景差异较大,不存在菌株克隆传播现象。通过电转化实验,在20株cfr阳性MRSA中有13株MRSA菌电转成功;再通过S1-PFGE和southern blot分析,通过cfr基因标记的特异性探针进行杂交,显色结果表示,在13株电转子中均杂交成功,而7株未电转成功的菌株均未杂交成功。在13株杂交成功的菌株中,有11株cfr基因位于大小~50 kb的质粒上,2株在~7.1 kb的质粒上,采用反向PCR和PCR-mapping两种方式对cfr阳性质粒进中cfr的基因环境进行检测。测序比对结果表明,本研究中的cfr阳性质粒具有两种不同的基因环境。第一种为rep-?pre/mob-cfr-pre/mob-ermC,该质粒大概有7.1kb;另一种基因环境,cfr基因位于一个结构变异体转座子Tn558,为tnpA-istA-istB-cfr-tnpB-tnpC-orf138-fexA,该遗传结构位于~50kb的cfr阳性质粒上。这两种基因环境均与在人医临床上或是兽医临床上的报道的相关质粒的片段是相似的。综上所述,本文研究中的MRSA菌株的耐药性普遍严重,cfr阳性MRSA菌株的耐药性比cfr阴性MRSA菌株的耐药性严重。质粒、插入序列以及转座子等可移动元件是本文研究中cfr基因在MRSA中主要传播载体。耐药基因ermC和fexA基因与cfr基因的协同传播进一步加剧了MRSA菌株的耐药性。本文的cfr基因从不同地区不同来源的MRSA菌株中检出,二者存在着共存的现象,进一步加重了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的防控难度,给公共卫生和人类健康带来潜在的危害。