研究背景肺癌发病率高,恶性程度高,预后差,死亡率高,占肿瘤相关死亡的首位。CSCs是一群异质性细胞,能自我更新并有无限增殖和多向分化潜能。肺癌干细胞与肺癌的发生发展,维持,侵袭转移,复发,耐药等密切相关。因此,对肺癌干细胞的研究可为肺癌提供更多的治疗方向。然而肺癌中肺癌干细胞含量极少,有效分离得到肺癌干细胞是进行肺癌干细胞研究的重要基础。我们将采用两种不同的方式来分离人肺癌细胞系NCI-H1650中的干细胞。目的分离出人肺癌细胞系NCI-H1650中的干细胞并进行鉴定。方法1.应用无血清培养联合紫杉醇刺激的方法诱导NCI-H1650干细胞。2.流式细胞术和免疫荧光检测诱导细胞表面CD133和C D326表达;采用RT-PCR和Western blot检测干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。3.应用免疫磁珠分选法分选NCI-H1650干细胞。4.免疫荧光检测磁珠分选细胞表面CD133和CD326表达;采用RT-PCR和Western blot检测干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。结果1.诱导NCI-H1650干细胞在SFM中呈球形生长。2.诱导NCI-H1650干细胞表达干细胞表面标志C D133和CD326。3.诱导NCI-H1650干细胞表达干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。4.磁珠分选细胞在SFM中呈球形生长。5.磁珠分选细胞表达干细胞表面标志C D133和C D326。6.磁珠分选细胞表达干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。结论1.无血清培养联合紫杉醇刺激能有效诱导NCI-H1650干细胞,并高表达CSCs表面标志CD133和CD326,高表达CSCs相关基因Oct-4、Nanog和Sox-2。2.免疫磁珠分选法能有效分选出NCI-H1650干细胞,并高表达CSCs表面标志CD133和CD326,高表达CSC s相关基因Oct-4、Nanog和Sox-2。