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目的①在体外建立共培养模型模拟胎盘屏障的跨细胞转运。②胎盘细胞凋亡在感染HBV的PBMCs转运中作用。方法①本次实验采用100μl HBV DNA含量为5×10~6copies/ml的病人血清感染PBMC,用CCK-8试剂盒检测不同共培养时间点12h、24h、48h和72h细胞的生长状况。将共培养的细胞清洗4次,用FQ-PCR法检测PBMC和洗液中的HBV DNA的含量。②在1μm孔径Transwell小室共培养模型中,用流式细胞技术(FACS)检测Transwell小室上室感染HBV的PBMC与BeWo的融合现象。以8μm孔径Transwell小室共培养模型中,用流式细胞技术(FACS)检测下室中是否出现标有绿色荧光的PBMC。③本次实验将共培养模型设立三个组:正常对照组、HBV与BeWo共培养组、HBV~+PBMC与BeWo共培养组,在共培养0h、12h、24h、48h后分别收集各组细胞通过FACS检测细胞的凋亡情况。④用RT-PCR法检测HBV~+PBMC与BeWo共培养组不同时间点0h、12h、24h、48h,BeWo细胞的Caspase3 mRNA的表达情况。⑤用FQ-PCR法检测HBV~+PBMC与BeWo共培养组下室中的PBMC的HBV DNA和HBVcccDNA含量。结果①5×10~6copies/ml的HBV阳性血清刺激PBMC,共培养12h、24h和48hPBMC的细胞数不断增加,共培养72h左右,细胞数会减少。与HBV血清共培养48h的PBMC检测出HBVDNA,提示发生感染,而清洗细胞的洗液中未检测出HBV DNA。②在1μm孔径的Transwell小室共培养模型中BeWo细胞被染上了绿色荧光提示HBV~+PBMC与BeWo发生了融合。以8μm孔径的Transwell小室进行实验,下室中检测到标有绿色荧光的PBMC,证明在Transwell小室共培养感染HBV的PBMC与BeWo细胞模拟胎盘屏障的跨细胞转模型构建成功。③BeWo与HBV血清和HBV~+PBMC共培养0h、12h、24h、48h,HBV感染组和HBV~+PBMC共培养组的早期凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(F值分别为0.027、1.824、7.186、7.749,P值均大于0.05)。在共培养0h、12h,HBV感染组和HBV~+PBMC共培养组,BeWo总凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(F值分别为2.922、1.356,P值均大于0.05);但是共培养24h、48h,HBV感染组总凋亡率与同期的对照组和HBV~+PBMC共培养组比较差异有统计学意义(F值分别为15.678、14.892,P值均小于0.05)。分别对同一组内不同时间点的早期凋亡率及总凋亡率进行比较,各组中不同时间点的凋亡率不同,随着共培养时间的延长,凋亡率呈现增加的趋势,到48h时HBV感染组总凋亡率为(68.90±0.33)%达到最高。不同时间点早期凋亡率的比较,除了对照组其它各组的差异均有统计学意义(F值分别为3.968、31.648、31.941,对照组P值大于0.05,其他各组P值均小于0.05),且不同时间点总凋亡率的差异有统计学意义(F值分别为82.827、29.292、63.951,P值均小于0.05)。④HBV~+PBMC与BeWo共培养组不同的时间点BeWo细胞Caspase3 mRNA的表达量相比较差别有统计学意义(F=38.114,P=0.002),且各组间两两比较后,除12h与0h外,Caspase3mRNA的相对表达量相比无差异外,其他各组间差异均有统计学意义。在24h和48h组中,随着时间的延长Caspase3 mRNA的相对表达量有升高的趋势。⑤在BeWo细胞和HBV~+PBMC共培养组中,BeWo细胞早期凋亡率与PBMC迁移率呈正相关关系(r=0.908,p=0.002),BeWo细胞总凋亡率与PBMC迁移率呈正相关关系(r=0.969,p=0.001)。BeWo细胞Caspase3 mRNA相对表达量和PBMC迁移率呈正相关关系(r=0.950,p=0.001)。⑥HBV~+PBMC与BeWo细胞共培养24h和48h时,下室的PBMC HBV DNA拷贝数分别为(1.925±0.431)×10~3copies/ml、(2.565±0.361)×10~3copies/ml,同时,在此时间点HBV cccDNA的拷贝数分别为(7.560±1.513)×10~2copies/ml、(1.3550±2.473)×10~3copies/ml,按判断标准HBV DNA拷贝数≥103copies/ml为阳性,提示此时间点下室中的PBMC发生感染,且按判断标准HBV cccDNA拷贝数≥5×10~2copies/ml为阳性,提示HBV发生复制。结论①乙型肝炎病毒能够在PBMC中复制,并在体外成功构建BeWo细胞与感染HBV的PBMC共培养模型模拟胎盘屏障的跨细胞转运。②胎盘细胞凋亡率与PBMC的迁移率的正相关关系,提示凋亡可能与感染HBV的PBMC的转运有关。③上室中感染HBV的PBMC转运至下室后,可感染下室的PBMC。可推论若感染HBV的母亲PBMC转运至胎儿血循环会造成胎儿PBMC HBV感染。