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目的:观察rAAV1-EGFP转染对于脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)生物学特性的影响;检测rAAV1-EGFP体外转染ADMSCs后,ADMSCs-EGFP同种异体移植能否在梗死心肌局部持续表达外源性EGFP。研究rAAV1-hHGF体外转染对于ADMSCs分泌功能的影响;探讨同种异体ADMSCs-hHGF移植治疗大鼠急性心肌梗死的可行性及有效性。方法:(1)观察rAAV1-EGFP转染对于ADMSCs生物学特性的影响。取雄性Wister大鼠附睾处脂肪组织,消化分离法获取ADMSCs,体外培养、扩增及鉴定,rAAV1-EGPF转染,观察转染后ADMSCs生长特点、表面特异性标记、多向分化潜能的变化情况。(2)鉴定同种异体ADMSCs-EGFP移植能否在急性心肌梗死大鼠的心肌局部持续表达外源性EGFP。将60只雄性Wister大鼠随机平均分为阴性对照组(n=15)、细胞移植1周组(n=15)、细胞移植4周组(n=15)、细胞移植8周组(n=15),采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备急性心肌梗死模型,采用经心外膜心肌直接注射的方法,于心肌梗死区及其周围分别注射PBS(阴性对照组)和ADMSCs-EGFP(细胞移植组),分别于术后1周末、4周末及8周末处死细胞移植组大鼠,应用荧光显微镜、EGFP免疫组织化学染色和图象分析方法检测同种异体ADMSCs-EGFP移植能否在急性心肌梗死大鼠的心肌局部持续性表达外源性EGFP。术后8周末处死PBS组大鼠作为阴性对照。(3)构建rAAV1-hHGF。ADMSCs接种至6孔板,接种细胞随机分为未转染组(阴性对照组)和rAAV1-hHGF转染组,应用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定转染hHGF后第1~8天内每日细胞上清液中hHGF浓度的变化情况,同时进行细胞计数,观察细胞分泌能力的改变。(4)同种异体ADMSCs移植联合转基因hHGF治疗大鼠急性心肌梗死。将100只雄性Wister大鼠随机平均分为PBS组(n=25),单纯ADMSCs治疗组(n=25),单纯hHGF治疗组(n=25),ADMSCs-hHGF治疗组(n=25),采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备急性心肌梗死模型,经心外膜心肌直接注射的方法给予相应治疗。术后8周末采用导管法及超声心动检测判定心脏功能,随后处死实验动物,行形态学检测并计算梗死面积(IS)、左室球形指数(SI)和扩张指数(DI),天狼猩红染色测定梗死区及非梗死区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数(CVF),免疫组织化学染色检测局部血管密度及MMP-2和MMP-9表达,行组织匀浆,应用RT-PCR法测定梗死组织中hHGF的mRNA水平,应用Western blotting法测定梗死组织中hHGF蛋白表达情况。结果:(1)rAAV1-EGFP转染后,大鼠ADMSCs可正常贴壁,生长迅速,细胞倍增时间(DT)约52.5h,多次传代后形态上无明显改变,其细胞表面特异性标记及多向分化潜能未受明显影响。(2)同种异体转基因ADMSCs-EGFP移植后,1周及4周时于梗死心脏局部均可观察到绿色荧光及相应部位EGFP的表达,两者相比无显著差异,移植后8周时梗死局部绿色荧光明显减弱,但仍可见少量EGFP表达。对照组未观察到绿色荧光及相应部位EGFP的表达。(3)成功构建携带目的基因hHGF的rAAV1。与未转染组相比,转基因ADMSCs-hHGF组上清液中hHGF的浓度及细胞分泌hHGF的能力均显著增加。(4)心肌梗死8周后,与PBS组相比,单纯ADMSCs组和转基因ADMSCs-hHGF组射血分数(EF)、左室搏出量(LVSV)及左室舒张末容积(LVEDV)显著增加,+dt/dpmax、+dt/dpmax/LVSP以及-dt/dpmax、-dt/dpmax/LVSP显著升高,左室相对重量显著增加,梗死区及边缘区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数均显著降低,而局部血管数目显著增多,MMP-2、MMP-9显著减少,但细胞凋亡指数(AI)没有明显变化。与单纯ADMSCs组相比,转基因ADMSCs-hHGF组局部血管数目增加更为明显,而MMP-9减少程度低于前者。同时,在细胞移植8周后,单纯hHGF组和转基因ADMSCs-hHGF组于大鼠梗死心肌组织中均可检测到hHGF的mRNA及相关蛋白表达。结论:rAAV1转染未明显影响ADMSCs的生物学特性;在心肌梗死区域移植ADMSCs-EGFP,术后4周于移植区域仍可检测到外源性EGFP持续性表达。rAAV1-hHGF转染后可提高ADMSCs分泌hHGF的能力;ADMSCs-hHGF能够在移植区域持续表达hHGF,并可提高ADMSCs新生血管功能,有助于急性心肌梗死后心脏功能的恢复。