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本文通过对灰树花多糖的提取、纯化和结构的研究,确定了多糖D-组份(G-D)提取和纯化的工艺条件,分析了灰树花多糖D-组份(G-D)的分子结构,并建立了灰树花多糖D-组份(G-D)的检验方法。 1.研究确定了灰树花粗多糖的一些分析方法,测得灰树花粗多糖中多糖含量为28.9%,蛋白质含量为35.61%,β-葡聚糖含量在3.3%~3.4%之间,粗多糖溶液的pH值为6.3。 2.通过对市场上几个主流的相关产品的分析,确立了G-D的HPLC检测方法。 3.确定了G-D分离纯化的工艺:分级醇沉中乙醇的浓度分别为45%和80%;选用DEAE Sepharose Fast Flow作为离子交换剂,离子交换时的最佳pH为7.2;为了进一步提纯G-D,又选用了Sepheracyl S-400作为凝胶过滤介质,同时确定了洗脱液的pH值为7.2,离子强度为1.0mol/L;最终获得纯度很高的G-D,得率为0.45%。它是一种棕褐色、易吸潮、水溶性好且水溶液吸光度为—62.5°的固体粉末。经过分析发现,它的多糖含量为79.5%,蛋白质含量为16.2%。 4.选用木瓜蛋白酶作为制备G-D糖肽时的水解酶,获得所需糖肽;通过β-消除反应和肼解反应发现,G-D中糖肽间的连接方式中没有或者只有极少量的O-型糖肽键,但一定含有N-型糖肽键;将肼解后的糖链进行完全酸水解,并分析它的单糖组成情况,发现它含有D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖,比例为1.8:0.4:29.4。通过傅立叶红外分析验证了G-D是一种糖蛋白,并发现它含有β-D-吡喃甘露糖。~1H NMR和~3C NMR分析发现,G-D中存在β-(1→6)连接方式。所以,G-D中主要是β-(1→6)-D-吡哺甘露糖苷键。 5.为验证本检测方法的实用性,对庆元灰树花粗多糖和迁西灰树花粗多糖中G-D含量进行比较发现,庆元灰树花中的G-D含量是迁西的1.78倍。 6.本文初步探讨了FPLC分离灰树花多糖中其它糖蛋白组份的方法,有一定的分离效果,但要分离到色谱纯的组分,分离柱类型和洗脱条件还需进一步选择优化。 本研究创新点在于: 1.建立了简便实用的灰树花多糖D-组份(G-D)的检测方法:硕士论文灰树花多糖D·组份的分离纯化及理化性质的研究23.确立了G一D简便、可靠的提取与纯化方法;.分析了G一D中糖肤间的连接方式,确认它没有或只含有少量的O一型糖肤键,但是含有N一型糖肤键;4.经完全酸水解,发现G一D糖链的单糖组成,除了甘露糖外还存在少量的葡萄糖和半乳糖;5.采用FT-RI检测和NMR分析发现,G一D是一种含有p一(l一6)一D一毗喃甘露糖普键的糖蛋白