【摘 要】
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家蚕作为重要的经济昆虫,阐明家蚕的免疫抗性对遗传育种领域有至关重要的作用。近年来有研究报道蜕皮激素（20-hydroxyecdysone,20E）可以诱导昆虫先天免疫发生,但关于20E调控抗菌肽合成的具体调控机制却尚不清楚。我们前期研究发现,家蚕（Bombyx mori）蜕皮激素调控蛋白（Esr16）可以响应脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）并诱导抗菌肽Moricin和Cecr
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家蚕作为重要的经济昆虫,阐明家蚕的免疫抗性对遗传育种领域有至关重要的作用。近年来有研究报道蜕皮激素（20-hydroxyecdysone,20E）可以诱导昆虫先天免疫发生,但关于20E调控抗菌肽合成的具体调控机制却尚不清楚。我们前期研究发现,家蚕（Bombyx mori）蜕皮激素调控蛋白（Esr16）可以响应脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）并诱导抗菌肽Moricin和Cecropin的表达。为进一步研究BmEsr16在20E调控先天免疫中的作用,我们通过Western-blotting、RT-q PCR和免疫荧光检测BmEsr16在家蚕发育阶段、20E处理活体家蚕和离体家蚕组织中的转录表达水平;进一步干扰20E信号通路中受体Ec R和USP基因,检测BmEsr16的表达水平;同时分析BmEsr16基因上游序列,进行启动子截短和突变实验,分析20E是否可以调控BmEsr16引起家蚕抗菌肽表达。主要研究结果如下:（1）Western-blotting和RT-q PCR检测家蚕脂肪体中BmEsr16的自然发育变化的转录表达,发现BmEsr16发育变化的转录水平和蛋白表达水平与蜕皮激素的滴度一致。（2）20E处理活体家蚕和离体家蚕,通过Western-blotting和RT-q PCR检测BmEsr16的表达水平,发现BmEsr16的转录水平和蛋白水平均能被20E上调。（3）干扰USP,检测BmEsr16的表达水平,发现BmEsr16在USP被干扰的情况下,其转录表达水平显著下调,抗菌肽Lebocin3的转录水平也显著下调。（4）通过双荧光素酶活性检测,发现20E能上调BmEsr16全长启动子的活性,对BmEsr16截短型启动子没有影响;与BmEsr16全长启动子比较,BmEsr16-wt△E74A、BmEsr16-wt△BR-CZ4-1095～～-1077bp、BmEsr16-wt△BR-CZ4-1064～～-1049bp、BmEsr16-wt△BR-CZ2、BmEsr16-wt△BR-CZ1缺失了相应的转录因子结合位点后,其双荧光素酶活性显著减弱;增加了顺式作用元件后,BmEsr16-wt△BRCZ1-CRE、BmEsr16-wt△BRCZ2-CRE和BmEsr16-wt△BRCZ4-1064-1049-CRE的双荧光素酶活性显著增强。通过启动子活性的检测,表明BR-CZ1、BR-CZ4-1064～-1049、BR-CZ2可能对BmEsr16启动子起作用。综上所述,20E通过USP上调了BmEsr16的表达,BR-CZ1、BR-CZ4-1064～-1049和BR-CZ2可能对调控BmEsr16启动子的活性有关键作用。
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