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野生花卉蓝刺头(Echinops latifolius Tausch.)具有较高的观赏及应用价值,具有很大的市场潜力,是一种亟待研究开发的新型花卉。本研究在引种驯化蓝刺头两年的基础上,对其群体进行优良单株的选择,并将选出的优良单株进行根段扦插繁殖。以根段扦插得到的不定芽、叶片为外植体,建立了蓝刺头的组培快繁和植株再生体系,并对其中的影响因素进行了研究;同时以根段为外植体对建立蓝刺头的再生体系进行了尝试。试验结果如下:
1.用加权系数法对所选植株进行综合评分,最终选出符合切花标准的四个类型的优良单株L2、L8、L13、L24。
2.建立了以不定芽为外植体的蓝刺头的组培快繁体系。最适的芽增殖培养基为MS+6-BA2.0mg·L<-1>+NAA0.2 mg·L<-1>,芽增殖系数达15.3,平均芽长为4.2cm;不添加任何植物生长调节物质的MS培养基是蓝刺头无菌苗最佳的壮苗培养基;无菌苗生根以大量元素减半的MS培养基附加0.5 mg·L<-1>的NAA和1.0 mg·L<-1>的IBA效果最好。组培苗的移栽基质可选择等比例混合的草炭与河沙。
3.对以根段为外植体的蓝刺头的再生体系的研究。结果表明,蓝刺头的根内生菌多,且有共生菌存在,很难得到完全无菌的材料。多次试验发现,先用0.1%升汞处理15min,无菌水冲洗一次,然后用0.1%升汞浸泡15min,相比其它处理可以得到较好的效果。另外,试验表明,2,4-D和KT组合虽然可以产生大量愈伤组织,但这些愈伤却没有芽点分化;根段在3.0mg·L<-1>6-BA附加0.2或0.8 mg·L<-1>的NAA组合中可以产生大量疏松的愈伤组织,再经过培养后产生绿色芽点,但是得到的不定芽玻璃化现象严重,可以在不添加植物生长调节物质的MS培养基中进行壮苗。
4.以根插苗叶片为外植体建立了蓝刺头高效的植株再生体系。结果表明,基本培养基MS附加6-BA 1.0 mg·L<-1>及NAA 0.1 mg·L<-1>是蓝刺头叶片最适的分化培养基;在最适分化培养基中添加2.0mg·L<-1>的硝酸银可以缩短不定芽分化的时间,提高再生率和分化芽数;叶片暗培养15d后转到光下,不定芽的再生率也有明显的提高。在不添加任何植物生长调节物质的MS培养基中对再生的不定芽培养,壮苗,生根培养基1/2MS+NAA 0.5 mg·L<-1>+IBA1.0 mg·L<-1>IBA中生根,然后进行炼苗移栽。另试验中发现,在添加硝酸银的培养基中培养的蓝刺头叶片表面产生大量的不定芽,而且不定芽生长健壮;仅在叶片切口处有少量的愈伤产生,其上也有不定芽的发生;因此,在添加硝酸银后蓝刺头不定芽产生的途径发生了改变,变成以直接发生为主,愈伤组织途径为辅。