论文部分内容阅读
目的:研究应用RNA干扰技术沉默人卵巢癌SW626细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因后,卵巢癌细胞CXCR4的蛋白表达情况,对卵巢癌细胞增殖活性的影响,推断其与卵巢癌发生、发展、治疗及预后的关系。方法:根据CXCR4基因编码序列及RNAi寡核苷酸设计原则,设计合成两对针对CXCR4基因的siRNA片段和1对FAM标记的阴性对照siRNA片段,序列经BLAST查询,确定为CXCR4特异性序列,排除与其他基因同源性。实验分为四个组:空白对照组、阴性对照组、实验S1组和实验S2组。用脂质体转染方法转染至卵巢癌SW626细胞中,荧光显微镜观察检测转染效率,采用Western blot检测RNA干扰后卵巢癌SW626细胞CXCR4蛋白的表达情况。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染前后细胞增殖的情况。结果:1、脂质体转染法转染卵巢癌SW626细胞48小时后,荧光显微镜观察,发现当卵巢癌细胞处对数生长期,培养24h后融合度为90%时进行转染,质粒和脂质体比例为1:3时转染效率最高,发绿色荧光的细胞数可达到70%以上。2、转染48小时后,用western blot法检测,①实验S1组和S2组与空白对照组和阴性对照组比较,卵巢癌SW626细胞CXCR4/β-actin蛋白表达水平降低,蛋白表达明显受抑制(P<0.05)。②阴性对照组和空白对照组比较:CXCR4/β-actin蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。③实验组Sl组和S2组比较:无显著性差异(P>0.05)。3、转染24h、48h、72h后,MTT法检测细胞增殖情况,结果显示:①实验S1组和S2组与空白对照组和阴性对照组比较,卵巢癌SW626细胞的增殖受到明显抑制,各检测点OD值显著升高(P<0.05)。②空白对照组和阴性对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。③实验组S1和S2组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:应用RNA干扰技术能特异性抑制人卵巢癌细胞的CXCR4蛋白的表达和抑制卵巢癌细胞的增殖,证实了应用RNA干扰技术能够抑制CXCR4基因表达的可行性。因此,本实验针对CXCR4基因构建的siRNA能有效的封闭CXCR4的表达,抑制卵巢癌细胞增殖,提示RNA干扰可能用于特异性阻断CXCR4表达,这提示针对CXCR4基因的RNA干扰技术有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。