栽培环境和施肥对圆齿野鸦椿三萜含量及抗癌活性影响研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zlp0234
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近年来,癌症发病率不断升高,严重威胁着人类生命和健康。传统化学治疗副作用大,因此寻找和培育具有优质抗肿瘤药效的天然植物成为目前研究的热点。本研究探讨不同生境和栽培措施下圆齿野鸦椿(Euscaphis konishii Hayat)不同器官总三萜含量和提取物抑癌作用的差别,从而筛选出最佳三萜含量和抗癌器官以及最佳栽培措施。为圆齿野鸦椿药用栽培建立了理论基础与技术体系,为圆齿野鸦椿开发利用提供科学依据与技术支持。本实验主要结论如下:(1)野鸦椿和圆齿野鸦椿由于遗传物质及熟期的不同,三萜含量也存在明显差异。8月份,本实验中野鸦椿已处于果实成熟期,处于旺盛生长向落叶前的过渡时期,此时野鸦椿叶片中三萜含量为4.48%,显著高于圆齿野鸦椿的含量3.89%,而圆齿野鸦椿11月进入果实成熟期时叶片中三萜含量均大于6.85%。8月圆齿野鸦椿枝条中的三萜含量为1.41%,略高于野鸦椿的含量1.20%,进入果实成熟期时三萜含量增加到2.89%以上。说明相同熟期圆齿野鸦椿三萜含量高于野鸦椿,且圆齿野鸦椿种子产量高,种苗繁育快,具有很好的开发前景。(2)圆齿野鸦椿不同器官(叶片、枝条、果皮和种子)三萜含量存在显著差异,11月采集各试验地的圆齿野鸦椿三萜化合物含量均为:叶片>枝条>果皮>种子,各器官最大三萜含量依次为9.06%、3.46%、2.36%和2.92%,说明叶片积累的三萜类物质含量较高。冬季低温更有利于圆齿野鸦椿三萜物质的产生和积累,3月份清流、邵武和农大植株的枝、叶总三萜化合物含量均明显大于11月份,最大者可提高172.91%。所以3月份或新叶绽放前为三萜化合物药用叶片最佳采收季节。(3)不同栽培区域对圆齿野鸦椿三萜含量影响显著,且不同器官三萜含量对栽培区域的响应并不一致;圆齿野鸦椿不同器官三萜含量与地理和气候因素存在一定的相关性,叶片、果皮和种子三萜含量与海拔和年降水量两个因素之间均表现出极显著的负相关关系,与年均气温之间表现出极显著的正相关关系。叶片三萜含量与年均无霜期呈正相关关系,其它三个部位三萜含量与年均无霜期无显著相关性;枝条三萜含量与各因素之间均不存在显著相关性。(4)施用氮、磷或钾肥对圆齿野鸦椿生长量具有显著影响。一定程度增施氮、磷或钾肥能促进植株生长,当单株N、P、K施肥量分别为50g、25g和50g时最有利于植株生长,最大胸径生长量和最大抽高分别为0.41cm和15.25cm,过量施肥则抑制生长。抽高对氮磷钾施肥量的响应方程为:Y=71.611x1+472.348x2+132.72x3-2325.933x12+1672.829x1x2+3178.233x1x3+1169.556x2x3-13961.188x22-3680.842x32+5.04,规划求解可得单株N、P、K最佳施肥量为53.93g、22.02g、44.81g,最大抽高为15.15cm。施肥对圆齿野鸦椿抽高和相胸径生长量影响规律基本一致。氮肥和钾肥之间存在显著交互作用。(5)施氮、磷、钾肥对圆齿野鸦椿叶片三萜含量影响显著,一定程度增加施肥量能够促进三萜的形成和积累;三萜含量与施肥量关系模型为Y=4.078+0.118x1+0.072x2+0.007x3-0.001x12-0.001x1x2+0.001x1x3+0.004x2x3-0.001x32-0.005x22,规划求解,得单株 N、P、K最佳施肥量分别为:164.50g,125.25g,336.25g。三种肥料两两之间存在交互作用,但只有P、K交互作用显著。通过氮、磷、钾对叶片三萜含量的单因素影响分析,得到三条响应曲线:Y=-0.0014x2+0.1341x+5.078,Y=-0.005x+0.2434x+5.103,Y=-0.0014x2+0.1326x+4.855。施用单一肥料时,最佳N、P、K施肥量及相应三萜含量分别为:47.89 g/株(8.29%)、24.34g/株(8.07%)、47.36g/株(8%)。(6)圆齿野鸦椿乙酸乙酯相浸膏对HepG2肝癌细胞均有显著或者极显著的抑制效果,抑制率具有显著的时间和剂量依赖性。与48h相比,72h抑制效果显著提高,最大抑制率为81.53%。3个栽培区域11月效应物对HepG2肝癌细胞的IC50数据表明,果皮、枝条部位的效果好于叶片和种子,IC50最小值分别为0.138mg/ml、0.14mg/ml、0.201mg/ml 和 0.222mg/ml。(7)不同栽培区域、季节对圆齿野鸦椿浸膏抗癌作用影响显著。但是由于不同器官的细胞特点和生理过程不同,其抗癌效果的响应也不一致;清流栽培区和冬季低温有利于圆齿野鸦椿抗癌活性物质的积累。3月份圆齿野鸦椿提取物抑癌活性大于11月份采收的圆齿野鸦椿枝、叶提取物,IC50最多可降低15.44%,所以3月份新叶绽放前为最佳采收时间,这个规律与3月份叶片三萜含量较高一致。(8)施肥能够显著影响圆齿野鸦椿提取物抑癌活性。氮磷钾水平配比施肥对叶片提取物抑癌活性影响显著,叶片抗癌活性对施肥量的响应模型为:Y=0.993-20.974x1-27.161x2-3.338x3+320.975x12+26.619x1x2-218.594x1x3-726.254x2x3+327.932x32+1242.299x22规划求解得单株N、P、K最佳施肥量分别为:48.096g、24.529g和48.281g,提取物对HepG2肝癌细胞抑制作用最强,IC50为0.075mg/ml。另外,氮钾之间以及磷钾之间存在着显著交互作用。叶片抑癌活性对氮、磷、钾单因素施肥的响应模型分别为:Y=302.8x2-29.834x+0.8327,Y=1176x2-58.828x+0.8487,Y=293.2x2-29.61x+0.8683;规划求解得最佳施肥量分别为:49.26g/株、20.016g/株、50.495g/株。
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