随着养犬业的迅速发展,对犬病的诊断和控制尤显重要。犬血清中IgG水平的测定,已是临床免疫检验和体液免疫研究的常用指标。作为研究工具,制备针对免疫球蛋白的多克隆或单克隆抗体已成为免疫学研究领域的热点。制备多克隆或单克隆抗体的关键就是分离纯化出尽可能多的纯度较高的免疫球蛋白,为此本文对犬血清IgG的纯化进行了探讨,并制备了多克隆抗体,对IgG部分特性进行了初步分析。采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析法从犬血清中获得IgG,经PAGE电泳、SDS-PAGE电泳和免疫电泳鉴定,纯化后的IgG达到了电泳纯。Folin-酚法测IgG浓度,绘制了纯化过程的洗脱曲线。纯化的犬血清IgG用于制备鼠抗犬血清IgG多克隆抗体。采用免疫双扩散法、间接ELISA法和Western Blot对鼠抗犬血清IgG多克隆抗体进行了鉴定,免疫双扩散法和间接ELISA法测得多抗的效价分别为1:16和1:128000,Western Blot显示出多抗与IgG的重链和轻链反应的两条特异性条带。建立了以纯化犬血清IgG为包被抗原的间接ELISA法,优化后得出以下最佳反应条件:抗原包被量为0.25ug/mL,阳性和阴性对照血清稀释度为1:2000,酶标抗体羊抗鼠IgG-HRP的稀释度为1:5000,底物最适作用时间在20min左右。对犬血清IgG的部分特性进行了分析:1、凝胶电泳分析变性还原条件下电泳(SDS-PAGE)结果表明,犬IgG重链和轻链分子量分别为58KD和27KD;变性非还原条件下电泳只有一条主要条带,分子量为170KD,与SDS-PAGE所测结果一致。2、木瓜蛋白酶酶解实验木瓜蛋白酶水解IgG得到29kD和27kD两个片断,WesternBlot分析其有很高的生物活性。3、Western Blot分析以鼠抗犬血清IgG多克隆抗体作为免疫印迹的探针,分析纯化犬IgG免疫原性和反应原性。Western Blot分辨力明显高于凝胶电泳,但杂条带明显增多,鼠抗血清可识别IgG、IgG重链和轻链,说明纯化IgG有良好的免疫原性和反应原性。