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背景:胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤。近年来,胰腺癌发病率在世界范围内呈明显上升趋势,但生存率却无明显提高,5年生存率<5%。胰腺癌的综合治疗中化疗仍然是最主要的辅助治疗方法。吉西他滨是经美国食品和药品监督管理局(FDA)批准的胰腺癌胰腺治疗一线化疗药物,但其临床疗效仍有待提高。先天性和获得性的耐药是胰腺癌化疗失败的主要原因。肿瘤干细胞学说的提出为人们重新认识胰腺癌的发生、发展和化疗耐药提供了新的理论基础。目的:1通过侧群细胞途径分选人胰腺癌细胞株中的肿瘤干细胞样细胞亚群,探讨sP细胞与肿瘤干细胞的相关性。2研究对比人胰腺癌细胞株中不同细胞亚群对化疗的耐受能力。3探讨人胰腺癌耐药细胞株中肿瘤干细胞及肿瘤干细胞相关Hedgehog通路成员的表达。4探讨抑制耐药株中Hedghog信号通路是否可以逆转胰腺癌细胞获得性耐药。方法:1采用Hoechst33342染色,流式细胞仪检测人胰腺癌BxPC-3、cFPAc.1、Mia Paca-2、PAMC-1、swl990中的sP细胞比例。分选出人胰腺癌细胞株swl990中的sP细胞。MTT法测定sP细胞与非sP细胞的生长曲线;流式细胞仪检测sP与非sP细胞的细胞周期分布;不同数量级的sP与非sP细胞接种BALB/c-nude小鼠,对比成瘤能力。2采用Hoechst33342染色及cD44、cD24流式抗体标记swl990细胞,流式细胞仪分选出肿瘤干细胞样细胞亚群。体外MTT法检测不同亚群细胞对吉西他滨的半数抑制率;不同浓度吉西他滨作用后,Annexin v加PI双染检测细胞凋亡;荧光定量PcR及westem blot检测不同亚群细胞中ABcBl、ABcG2和shh、G1i-1的表达。3建立人胰腺癌swl990耐吉西他滨细胞株,检测耐药株中sP细胞的比例,及cD44+cD24+、cDl33+细胞亚群的比例;荧光定量PcR及western blot检测耐药株与亲代细胞中ABCB1、ABCG2和SMO、Gli-1的表达的差异。4.采用Hedgehog信号通路抑制剂环王巴明作用耐药细胞株，比较作用前后CD44+及CD133+细胞亚群比例变化；荧光定量PCR及Western blot比较作用前后耐药株中ABCB1、ABCG2和SMO、Gli-1的表达差异；再次以高浓度吉西他滨作用耐药株，Annexin V加PI双染检测细胞凋亡及死亡率。结果：1. BxPc-3、CFPAC-1、MIA PaCa-2、PANC-1和SW1990细胞中SP细胞的比例分别为0.79±0.11%、2.59±0.19%、0.03±0.02%、7.57±1.87%、4.19±0.98%。SW1990中SP细胞与非SP细胞在生长曲线方面没有差异；相对非SP细胞而言，SP细胞更多地处于G0-G1期；SP细胞具有分化出不同表型细胞的能力和更强的体内成瘤能力。2.人胰腺癌细胞株中SP细胞和CD44+CD24+细胞亚群具有更强的化疗耐受能力，对吉西他滨IC50高于非肿瘤干细胞亚群；人胰腺癌肿瘤干细胞亚群更能耐受药物作用后凋亡；SP细胞亚群和CD44+CD24+细胞一样高表达ABCB1、ABCG2和Shh、Gli-1。4. 2μM环王巴明作用耐药SW1990细胞一周后，CD44+、CD133+细胞比例明显下调；荧光定量PCR及Western blot结果提示ABCB1、ABCG2和SMO、Gli-1表达较处理前明显降低；再次高浓度吉西他滨作用后，耐药细胞中凋亡及死亡细胞数明显增高。结论：1.人胰腺癌SW1990细胞株中SP细胞具有肿瘤干细胞特征。2. SW1990细胞株中肿瘤干细胞样亚群具有更强的化疗耐受能力，高表达部分Hedgehog信号通路成员。3.人胰腺癌SW1990耐药细胞株中高富集肿瘤干细胞，高表达Hedgehog信号通路成员SMO及Gli-1。4.抑制耐药株中Hedgehog通路，可以降低耐药株中肿瘤干细胞比例；下调SMO及Gli-1水平，逆转耐药株获得性耐药，部分恢复耐药株对吉西他滨的敏感性。