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猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)是危害规模化养猪生产的重要病毒性传染病。目前,接种基因缺失疫苗是控制PRV的主要手段。怀孕母猪产前适宜免疫时间和仔猪适宜首次免疫时间,在防制本病中起关键作用。
为掌握当前广东部分地区PR的野毒感染和PR引起猪死亡所占比例情况,运用本实验室建立的PCR方法,对采自广东部分地区25个猪场可疑PR病死猪的脑、肺组织共210份病料进行PRVPCR检测诊断;同时运用gE-ELISA方法,对采自上述广东部分地区接种过PR基因缺失苗的规模化猪场的母猪、公猪、仔猪和商品猪的血清共1627份,检测PR野毒感染情况,为PR的防制奠定基础。
为确定怀孕母猪产前适宜免疫时间和仔猪适宜首次免疫时间,选取健康怀孕母猪120头,随机分成8组,每组15头,各组分别在母猪产前10d、20d、30d、40d进行免疫接种,其中1~4组接种进口B厂PRgE基因缺失弱毒疫苗,5~8组接种国产A厂PRgE基因缺失弱毒疫苗。各组怀孕母猪于免疫前和免疫后10d、15d、30d、60d、120d、150d分别采血,进行PRV全基因抗体水平检测,同时各组于150d检测野毒抗体。上述各组母猪其产仔后各组抽15头仔猪于10、30、60、80日龄采血,检测仔猪母源抗体水平,同时各组小猪于10、60、80日龄采血检测野毒抗体。根据试验结果,在一个PR流行较严重的规模化猪场进行田间试验,取得了较理想的效果,为临床防制PR提供了理论与技术依据。
1.所建PCR方法检测PRVgD基因片段敏感性高、特异性强、快速,适用于临床PR病料的诊断;用PCR检测25个猪场,其中24个检出PR阳性,场阳性率96%,PR总体感染平均阳性率达60.5%(127/210),PR感染阳性率最高为100%。用gE-ELISA检测广东部分地区猪场1627份血清PR野毒感染率达44.9%,最高为100%。表明PR感染普遍,不同地区、不同猪场阳性率有一定差异。
2.对试验母猪及其仔猪分组,应用国产和进口B厂PRgE基因缺失弱毒疫苗免疫,应用国产PR全基因ELISA试剂盒,检测母猪和仔猪免疫后PRV抗体水平和消长规律。结果表明各组母猪产前10d、20d、30d、40d免疫接种后10d都能产生较高的抗体水平,30d时母源抗体达到峰值,母猪产前30d免疫接种其产仔时母猪抗体水平合格率为100%,恰巧达到最佳值。各组母猪产前10d、20d、30d、40d免疫接种后其所产仔猪均可获得较高母源抗体水平,产前30d免疫接种时其所产仔猪30d时获得母源抗体合格率为93.3%以上,且母源抗体可在其后代维持60d。根据母猪产仔时抗体水平和母源抗体在其后代的维持时间,建议母猪产前30d为加强免PR疫接种的适宜时间,仔猪60日龄为适宜的首免时间。
3.PR野毒抗体ELISA诊断试剂盒较适用于猪场PRV的疫苗免疫猪和野毒感染猪的区别诊断和流行病学普查。分别检测了国产A厂PRgE基因缺失弱毒疫苗和进口B厂PRgE基因缺失弱毒疫苗的免疫防制效果和仔猪免疫接种后不同时间的野毒抗体水平。结果表明进口B厂PRgE基因缺失弱毒疫苗较国产A厂PRgE基因缺失弱毒疫苗更安全、有效,是当前防治伪狂犬病较理想疫苗。并对一个PR感染率为13.3%的规模化猪场进行免疫防制措施调整,试验一年后PR感染率下降为9.6%,取得较理想结果。