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柞蚕(Antherea pernyi Guerin-Meneville),又称家蚕,原产中国,以柞树叶为食料的吐丝结茧的经济昆虫,属鳞翅目,大蚕蛾科。蚕蛹(silkworm pupa),又名“小蜂儿”,是家蚕生命周期中的一个发育阶段,是缫丝工业的主要副产物。我国是世界上最主要的蚕丝生产国,每年可产鲜蚕蛹五十万吨以上。2001年中国国家经贸委发布的《茧丝绸行业“十五”规划》中预计到到2015年,蚕茧产量将超过60万t,生丝年产量将达到8万t以上。在2010年,我国蚕茧产量已经超过64万t,创历史新高。通常缫制1t生丝可得1t干蚕蛹,蚕蛹产量非常可观。由于缺乏深加工技术,大量蚕蛹基本上都用作饲料和肥料,资源利用率和附加值低。干蚕蛹的粗蛋白质含量高达45%-50%,油脂含量20%-30%,蚕蛹油约含有75%的不饱和脂肪酸和20%的饱和脂肪酸。不饱和脂肪酸主要由油酸、亚油酸和亚麻酸组成,饱和脂肪酸主要为棕榈酸和硬脂酸。蚕蛹中还含有多种维生素(维生素A、维生素B、维生素D等),微量元素(铁、锌、硒等)以及少量粗纤维、几丁质、甲壳素、抗菌肽、激素、溶菌酶、多糖等。蚕蛹蛋白质经测定含有18种人体所需的氨基酸,蚕蛹中常见的17种氨基酸占总氨基酸质量分数的34.57%。因此,综合开发利用蚕蛹资源具有重要的意义和非常广阔的前景。本文的研究工作主要侧重于脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽及其纯化方面。首先从蚕蛹脱脂蛋白的酶解入手,选择合适的蛋白酶,进行单因素试验,再通过Box-Behnken设计响应面优化试验,然后依次采用大孔树脂、葡聚糖凝胶、半制备液相色谱技术对蚕蛹ACE抑制肽进行分离纯化,最后得到其氨基酸序列,这为人工合成ACE抑制肽提供了实验依据。本文主要研究结果如下：(1)蛋白水解酶选择试验本试验选择中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶6种蛋白酶进行脱脂蚕蛹蛋白的酶解效果试验,以DH和ACE抑制率作为考察指标,最后得出碱性蛋白酶制备的抑制肽ACE抑制率最高,达到32.46%。因此,选择碱性蛋白酶作为试验用酶。(2)脱脂蚕蛹蛋白酶解技术参数的优化试验在优化试验之前进行了底物浓度、温度、时间、加酶量、pH的单因素试验,得出其较佳的值,在此基础上再进行Box-Behnken响应面试验,最后得出其最佳的酶解技术参数：底物浓度11.88%,温度50.22℃,pH9.46,加酶量7.03%,酶解4h后经冷冻干燥,在此条件制备的酶解产物的IC5o为1.32mg.mL-1,其曲线方程：y=-9.83747x2+40.42596x+13.61453(R2=0.9868)。(3)大孔树脂分离纯化蚕蛹ACE抑制肽的试验本试验考察了D101、AB-8、DA201-C、HPD-400、HPD-826五种大孔树脂对蚕蛹ACE抑制肽的吸附洗脱效果,发现DA201-C的吸附率、解析率都是最大的,其吸附率为45.79%,解析率为66.43%。因此,选择DA201-C继续下面的试验。考察了样品上样浓度、上样流速和乙醇洗脱剂浓度对蚕蛹ACE抑制肽分离纯化效果,最后得出上样浓度为50mg/mL,上样流速为0.5mL/min,乙醇洗脱剂的浓度为75%时分离纯化效果最好。当乙醇浓度为75%时,洗脱液(记为a)具有最高的疏水值为5.98kJ/mmol,最高的芳香族氨基酸含量11.13%,最高的ACE抑制率57.79%。疏水性值、芳香族氨基酸含量与ACE抑制率呈正相关。在此条件下得到的解析液(记为a)的IC5o=0.632mg.mL-1,曲线方程为：y=-21.74174x2+76.79228x+10.1188(R2=0.999)。(4)蚕蛹ACE抑制肽的Sephadex G-25纯化将得到的解析液(a),再经过Sephadex G-25纯化,出现3个峰,其ACE抑制率分别为：a-P1为24.82%,a-P2为34.37%,a-P3为52.64%(多肽浓度为0.2mg/mL),因此选择a-P3进行下一步试验。(5)蚕蛹ACE抑制肽的半制备RP-HPLC纯化及其结构鉴定将a-P3进行半制备RP-HPLC分析,发现其分为10个峰,其中a-P3-6的ACE抑制率最高为52.07%(多肽浓度为0.05mg/mL)。再将a-P3-6进行液相色谱分析,其分为2个峰,其中a-P3-6-b的ACE抑制率稍高为54.27%(多肽浓度为0.05mg/mL)。将a-P3-6-b进行氨基酸序列分析,最后得出其序列为Val-Glu-Ile-Ser (缬氨酸-谷氨酸-异亮氨酸-丝氨酸)(6)蚕蛹ACE抑制肽的理化性质研究蚕蛹ACE抑制肽(组分a-P3)在pH 2-10范围内的溶解度均大于80%。蚕蛹ACE抑制肽(组分a-P3)经消化酶水解后活性变化不大,经胃酶和胰酶作用后,其ACE抑制率(0.8mg/mL)降低了1.90%。当温度在20～50℃时,温度对ACE抑制率的影响较小。蚕蛹ACE抑制肽(组分a-P3)在中性和偏酸性的条件下比较稳定。当NaCl浓度大于0.8 mol/L时,其ACE抑制率急剧降低。本文为国家桑蚕产业技术体系“蚕茧综合利用项目”(编号：CARS-22-ZJ0503)的部分研究内容。