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研究目的：乳腺癌是全球范围内高发恶性肿瘤之一,约有16%的女性受累。肿瘤相关性巨噬细胞(Tumor-associated macrophages, TAMs)起源于血液中的单核细胞,通过肿瘤细胞或间质细胞分泌的趋化因子招募至肿瘤组织中,在肿瘤微环境下促进肿瘤细胞增殖侵袭和迁移、新生血管形成以及产生免疫抑制等方面有重要作用。FOS相关抗原-1(Fos-related antigen 1, Fral)是癌基因下游激活通路上的一个重要转录因子,广泛参与细胞转录和转录后调控等多个生物学过程。在肿瘤微环境中多种细胞因子诱导下,TAMs高表达Fral,促进巨噬细胞向M2型极化。JQ1是一种可入胞浆的小分子抑制剂,具有乙酰化赖氨酸结合位点,可竞争性结合BET家族的结构域(bromodomain and extra-terminal family member)BRD4,我们通过前期筛选发现JQ1可以明显抑制Fra1蛋白的表达抑制乳腺肿瘤细胞的克隆形成,还可以减少ALDH阳性的肿瘤干细胞群落。本研究通过体外实验,研究JQ1抑制TAMs中Fra1蛋白的表达对巨噬细胞表型以及对乳腺癌细胞的迁移能力的影响；通过小鼠体内实验来探索通过JQ1抑制Fra1表达后对小鼠乳腺癌原发灶和转移灶的治疗效果。研究方法：首先检测JQl对巨噬细胞和肿瘤细胞内Fral蛋白的表达量的影响,确定Fra1蛋白在本研究实验所用细胞系有稳定表达。然后探索JQ1对RAW264.7巨噬细胞系Fral蛋白表达的影响及其细胞毒性作用,以摸索后续实验的工作浓度。进一步我们利用IL-4和(或)4T1肿瘤细胞上清诱导RAW264.7细胞,使其具有类似M2型表型,利于Western Blot观察JQ1对诱导后RAW264.7细胞内Fra1蛋白表达的抑制,RT-qPCR方法检测JQ1对诱导后的RAW264.7细胞的M1型巨噬细胞表型分子(IL-1b, Nos2,MCP-1, TNF-a)和M2型巨噬细胞表型分子(Argl, Fizz, Fral, Yml)在mRNA表达水平的变化；通过Western Bolt来检测其中Argl和Nos2的蛋白表达含量；利用流式细胞仪检测IL-4诱导后的小鼠腹腔巨噬细胞中,F4/80+和CD206+细胞比例的变化。通过细胞迁移实验来检测经JQ1处理的RAW264.7细胞对小鼠乳腺癌肿瘤细胞4T1迁移的影响。最后在小鼠的乳腺癌动物模型上,检测通过腹腔注射JQ1抑制巨噬细胞Fra1蛋白表达后,对小鼠乳腺癌原位瘤和远处肺转移的影响。研究结果：1.Fral在巨噬细胞系RAW264.7(小鼠)、THP1(人)、U937(人)细胞内都有稳定表达,在一些肿瘤细胞系4T1(小鼠乳腺癌细胞)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)、HUT78(人T淋巴细胞白血病细胞)内都有稳定表达。2.JQ1在RAW264.7细胞内,10nM可以有效抑制该细胞Fral蛋白的表达,并且细胞保持良好活力状态。3.经过IL-4和(或)4T1肿瘤细胞上清诱导后,RAW264.7细胞M1型巨噬细胞相关表型分子(IL-1b、Nos2、Mcp1、TNF-α)的mRNA表达水平下调,JQ1处理组的表达水平明显回升。4.经过IL-4和(或)4T1肿瘤细胞上清诱导后,RAW264.7细胞M2型巨噬细胞相关表型分子(Arg1、Fizz1、Fra1、Ym1)的mRNA表达水平上调,JQ1处理组的表达水平明显回落。5.JQ1诱导M1型巨噬细胞表型分子蛋白Nos2蛋白表达上调；而M2型巨噬细胞表型分子蛋白Arg1蛋白表达下调。6.JQ1抑制巨噬细胞内Fra1表达后,F4/80+细胞群中,CD206+细胞群比例比阳性对照组明显下调。7.JQ1可明显缓解M2型巨噬细胞对肿瘤细胞的促迁移能力8.JQ1联合紫杉醇在小鼠荷瘤实验中,明显抑制小鼠乳腺癌原位肿瘤和肺转移。结论Fral抑制剂(JQ1)通过抑制巨噬细胞的Fral蛋白表达从而抑制巨噬细胞向M2型分化,进而降低肿瘤细胞的迁移能力,可能减少小鼠乳腺癌肿瘤原位生长和肺转移。