【摘 要】
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高迁移率族蛋白B1(HMGB1)存在于真核细胞核内,是与非组蛋白染色体结合的蛋白,HMGB1具有高度保守性,在固有免疫应答中起到了关键性作用,被释放到细胞外的HMGB1,能引起炎症反应
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高迁移率族蛋白B1(HMGB1)存在于真核细胞核内,是与非组蛋白染色体结合的蛋白,HMGB1具有高度保守性,在固有免疫应答中起到了关键性作用,被释放到细胞外的HMGB1,能引起炎症反应,七鳃鳗是现存的最古老的无颌类脊椎动物,目前七鳃鳗HMGB1在固有免疫中发挥着怎样的功能尚未报道。本研究通过流式细胞术(FACS)检测了39.36%白细胞上标记了HMGB1分子和46.58%神经轴体细胞上标记了HMGB1分子,激光共聚焦显微镜技术定位HMGB1蛋白存在于七鳃鳗细胞胞浆中,不存在于细胞核中,以及免疫组织化学技术检测HMGB1在七鳃鳗神经轴体、鳃、肠和肾组织中都有表达和分布。通过Western Blotting检测了HMGB1在日本七鳃鳗神经轴体中的高表达以及体外细胞实验检测七鳃鳗HMGB1属于分泌型蛋白,并且能够主动分泌到培养基中,以及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测在大肠杆菌刺激后,HMGB1基因表达量与正常组相比有显著上调。诱导表达重组日本七鳃鳗HMGB1(rLj-HMGB1)蛋白,超高分辨率显微镜检测神经轴体中Lj-HMGB1蛋白与LIP蛋白共存在于一种细胞上,之后分别从免疫共沉淀在神经轴体细胞中检测天然HMGB1和天然LIP蛋白之间有一定的相互作用,等温滴定量热法实验(ITC)检测了rLj-HMGB1蛋白与重组Lamprey immune protein(LIP)蛋白有一定的相互作用,以上免疫共沉淀和等温滴定量热法实验证明了日本七鳃鳗HMGB1蛋白与LIP蛋白有一定的相互作用。通过半定量和实时荧光定量PCR检测在体内以rLj-HMGB1蛋白免疫七鳃鳗后以及体外以rLj-HMGB1蛋白刺激神经轴体细胞后炎症因子MIF、IL-8和IL-17基因表达量比正常组有下调趋势,并且IL-8和IL-17基因表达量有显著下调,说明在rLj-HMGB1刺激后,并没有发生促炎反应,本论文从免疫功能方面对日本七鳃鳗HMGB1蛋白进行了研究,这些结果为探究七鳃鳗固有免疫系统起源和进化奠定了一定基础。
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