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本研究分别扩增JEV CQRC-1株E蛋白结构域Ⅲ上线性中和抗原表位EⅢ′基因和PPV SC-1株VP2基因,然后运用重叠PCR将VP2基因和EⅢ′基因通过Linker连接构建得到融合基因EⅢ’-VP2,并将其定向克隆到pMDl9-TSimple载体上。再将EⅢ’-VP2目的基因定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)得到共表达重组质粒pcDNA-EⅢ’.VP2.PCR扩增猪IL-2基因,将其定向插入真核载体pcDNA3.1(+)和重组载体pcDNA-EⅢ’.VP2得到重组质粒pcDNA-IL2和pcDNA-IL2-EⅢ’.VP2.采用脂质体介导法将重组质粒pcDNA-EⅢ’.VP2和pcDNA-IL2-EⅢ’.VP2 DNA转染哺乳动物细胞Vero细胞,其表达产物通过RT-PCR和间接免疫荧光法检测目的基因的转录与表达,能观察到目的条带和间接免疫荧光,证明成功构建了pcDNA-EⅢ’.VP2和pcDNA-IL2-EⅢ’.VP2真核载体。将重组质粒pcDNA-IL2-EⅢ’.VP2(A组)、pcDNA-IL2/pcDNA-EⅢ’.VP2 (pcDNA-IL2先于pcDNA-EⅢ’.VP2三天注射,B组)、pcDNA-EⅢ’.VP2/pcDNA-IL2 (pcDNA-EⅢ’.VP2先于pcDNA-IL2三天注射,C组)、pcDNA-EⅢ’.VP2(D组)免疫BALB/c鼠,同时设立猪细小灭活苗(E组)、猪乙脑弱毒疫苗(F组)和pcDNA3.1(+)空载体组(G组)作为对照组,免疫3次,间隔两周。通过检测免疫小鼠血清JEV(PPV)抗体效价、脾淋巴细胞增殖功能、外周血T细胞亚群值变化比较了重组猪IL-2对pcDNA-EⅢ’-VP2核酸疫苗免疫增强作用。结果显示首免1周后各实验组JEV/PPV抗体水平明显高于空载体对照组,A、C组显著或极显著高于D组,B组抗体水平二免后上升较快,显著高于D组。细小疫苗组PPV抗体水平除第5周显著低于D组外,其他时间与D组抗体水平差异均不显著。乙脑疫苗组JEV抗体水平第5周与A、B、C三组差异不显著,其他时间显著或极显著高于A-D四组。二免后,各组均能诱导小鼠产生较强的脾细胞增殖,A、B、C组SI值显著或极显著高于D组,其中A、C组极显著高于B组,质粒组SI值始终高于细小疫苗组,却低于乙脑疫苗组。CD4+值和CD4/CD8值显示A、B、C三组值均高于D组,其中A组最高,但A、B、C三组间CD8+值差异不具统计学意义(P>0.05),各组CD4+、CD8+值都低于乙脑疫苗组,高于细小疫苗组。结果表明,共表达真核质粒pcDNA-EⅢ’.VP2能诱导小鼠产生一定的体液和细胞免疫；重组猪IL-2对pcDNA-EⅢ’.VP2共表达核酸疫苗免疫原性有很好的增强作用,其中IL-2与EⅢ’-VP2形成融合基因构建的核酸疫苗免疫效果最好。研究结果为新型、高效的乙脑和细小疫苗提供了数据参考。