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补体系统是人类自身免疫系统的一个重要组成部分，是由30余种广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面的蛋白质组成的，具有精密调控机制的蛋白质反应系统，其活化过程表现为一系列丝氨酸蛋白酶的级联酶解反应。补体系统参与机体的特异性和非特异性免疫机制反应，表现为抗微生物防御反应，免疫调节及介导免疫病理的损伤性反应。但是补体系统的非正常激活会引起人体免疫机制的过度反应，会引起类风湿性关节炎、老年痴呆、系统性红斑狼疮、缺血性再灌注、急性肌梗死、急性呼吸窘迫综合症等[1,2]。 广藿香为唇形科刺蕊草属植物广藿香Pogostemon cablin(Blanco) Benth.的全草，具有芳香化湿、开胃止呕、发表解暑的功效，是临床常见的芳香化湿中药，主治湿浊中阻、脘痞呕吐、暑湿倦怠、胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛等[3]。本课题组在前期对常用中药的筛选过程中，发现广藿香的醇提物具有很强的补体抑制活性（CH50=0.017 mg·mL-1，AP50=0.46 mg·mL-1），但迄今未见对广藿香中抗补体活性成分的研究报道。为了进一步探寻其抗补体活性的物质基础，本课题以抗补体活性为导向，从广藿香乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位和石油醚部位大极性组分中分离鉴定了24个化合物。采用细胞溶血法测定了所有化合物对经典和旁路途径的抗补体活性，并选择活性较强的槲皮素-7，3，4-三甲醚(7)和1β-OH-10βH-愈创木-4，11-二烯-3-酮(22)进行了抗补体作用靶点研究。本课题对广藿香抗补体活性成分的初步研究，为广藿香在治疗补体过度激活相关疾病方面的应用和开发提供了科学依据。主要研究结果如下: 1.抗补体活性部位的确定 采用体外细胞溶血法，考察了广藿香不同萃取部位的抗补体活性。广藿香提取的挥发油成分无活性，醇提物有较强的活性，其CH50为0.017 mg·mL-1。进一步对醇提物进行萃取，所得的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位的CH50分别为0.025 mg·mL-1、0.10 mg·mL-1、0.26 mg·mL-1，而水提取物并无抗补体活性。对石油醚部位的进一步的分析，发现石油醚部位的挥发性成分亦无活性，而去除挥发油后的大极性组分活性较强（CH50=0.026 mg·mL-1）。因此，确定乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位以及石油醚部位大极性组分为广藿香的抗补体活性部位。 2.活性部位的抗补体活性导向分离 以抗补体活性为导向，从乙酸乙酯部位活性较强的Fr.2(CH50=0.68mg·mL-1)、Fr.3(CH50=0.56 mg·mL-1)、Fr.4(CH50=0.24 mg·mL-1)和Fr.6(CH50=0.55 mg·mL-1)4个组分中分离鉴定了17个化合物(1～17);从正丁醇部位活性较强的30％乙醇洗脱部位(CH50=0.32 mg·mL-1)分离鉴定了4个化合物(18～21);从石油醚部位的大极性组分活性较强的Fr.5(CH50=0.10 mg·mL-1)和Fr.6(CH50=0.029 mg·mL-1)2个组分中分离鉴定了3个化合物(22～24)。 以上化合物包括黄酮类化合物15个:5-羟基-3，7，3，4-四甲氧基黄酮(1)，5-羟基-7，3，4-三甲氧基-二氢黄酮(2)，5，4-二羟基-3，3，7-三甲氧基黄酮(3)，5-羟基-3，7，4-三甲氧基黄酮(4)，5，4-二羟基-7，3-二甲氧基黄酮(5)，木犀草素(6)，槲皮素-7，3，4-三甲醚(7)，岳桦素(8)，3，5，7-三羟基-3，4-二甲氧基黄酮(9)，槲皮素(10)，5，3-二羟基黄酮(11)，山柰酚(12)，5-羟基-7，3，4-三甲氧黄酮(13)，山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(14)，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷-7-O-α-L-鼠李糖苷(15);萜类化合物3个:齐墩果酸(16)，1β-OH-10βH-愈创木-4，11-二烯-3-酮(22)，(5R)-5-羟基-广藿香醇(23);甾体类化合物2个:β-谷甾醇(19)，β-胡萝卜苷(20);酚酸类化合物2个:香草酸(17)，对甲基苄醇(18);腺苷类化合物1个:脱氧腺苷(21);吡喃酮类杂环化合物1个:4-甲基-6-异戊基-2-吡喃酮(24)。其中，化合物5、7、8、12、13、16、17、18、21、22和24均为首次从唇形科刺蕊草属植物中分离得到。 3.单体成分的活性测定和靶点研究 通过细胞溶血实验，对所有的化合物进行了经典和旁路途径的抗补体活性测试，发现化合物3、5、6、7、10、12、16、22、23和24这10个化合物对补体系统显示了不同程度的抑制活性(CH50:0.054～1.08 mg·mL-1; AP50:0.39～0.49mg·mL-1)。并对活性较强的槲皮素-3，4，7-三甲醚(7，CH50:0.072 mg·mL-1; AP50:0.48 mg·mL-1)和1β-OH-10βH-愈创木-4，11-二烯-3-酮(22，CH50:0.085 mg·mL-1;AP50:0.49 mg·mL-1)进行了靶点作用的研究，结果表明化合物7主要作用于补体系统的C1q，C2，C5和C9组分，而化合物22主要作用于补体系统的C1q，C2，C4、C5和C9组分。 4.广藿香石油醚部位抗补体活性成分的GC-MS研究 对广藿香石油醚部位的大极性组分进行了GC-MS分析，通过与GC-MS谱库比对，除化合物22～24外，又鉴定了10个成分(25～34)，包括长链烷烃及其衍生物，羰基化合物、单萜类化合物和倍半萜类化合物，其中9个化合物为从广藿香中新鉴定出的成分，并测定了各化合物的相对含量。 通过对10批不同批次广藿香药材石油醚部位的抗补体活性、化合物22-24相对含量的相关性的比较分析，发现石油醚部位的活性与1β-OH-10βH-愈创木-4，11-二烯-3-酮(22)，(5R)-5-羟基-广藿香醇(23)和4-甲基-6-异戊基-2-吡喃酮(24)的含量均具有相关关系。