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目的 通过原代培养胎鼠大脑神经细胞研究神经元缺氧后神经细胞活力和NO（一氧化氮）产量的变化及丙泊酚预处理和丙泊酚后处理对缺氧胎鼠神经元神经细胞活力和NO产量的影响，同时研究在正常培养条件下，不同浓度丙泊酚作用不同时间后鼠脑神经元中Hsp70（热休克蛋白70，诱导型）、Hsp70mRNA和Hsc70mRNA（热休克同源蛋白70，结构型）的表达，从细胞水平上阐明丙泊酚脑保护作用机制，为临床上运用丙泊酚脑保护作用时合理地选取丙泊酚的给药时机和给药浓度提供理论依据。 方法 取胎龄为16～18天的胎鼠大脑神经元进行原代分离培养，应用倒置相差显微镜进行细胞形态学观察，MTT法（改良四甲基偶氮唑盐光吸收检测法）进行细胞酶学分析，硝酸还原酶法测定细胞内NO的产量，免疫组化法观察Hsp70的表达，原位杂交法观察Hsp70mRNA及Hsc70mRNA的表达。实验分为五部分：1．研究在正常培养条件下不同浓度丙泊酚对原代培养胎鼠神经元神经细胞活力的影响。培养12天的胎鼠大脑神经元随机分为两组：①正常对照组；②实验组：选取5个丙泊酚浓度（1.4，5.6，14，56，140μM），作用1h，比较各组神经元光密度值（OD值）。2．研究不同浓度丙泊酚预处理和后处理对缺氧鼠脑神经元神经细胞活力和NO产量的影响。培养12天的胎鼠大脑神经元随机分为四组：①正常对照组；②缺氧组：37℃，95％N2+5％CO2，30min；③丙泊酚预处理组：根据前实验选取有效丙泊酚浓度，于缺氧前1h加入培养液，随后缺氧30min；④丙泊酚后处理组：于缺氧后即刻加入内泊酚，作用1h。②、③、④组又分为5个亚组，t1、t2、t4、t6和t24，分别代表5个复氧时间，即复氧后1h、2h、4h、6h和24h，分组比较各组神经元OD值和NO值。3．研究在正常培养条件下不同浓度丙泊酚作用不同时间后鼠脑神经元Hsp70的表达。培养12天的胎鼠大脑神经元随机分为三组：①正常对照组；②14μM丙泊酚处理组；③56μM丙泊酚处理组。其中②、③组又分为4丙泊酚对原代培养胎鼠大脑神经元缺氧州害保护作川的研究硕士:研究产!:.学褚忆沦文个亚组，t3、t8、t24和t48，分别代表4个丙泊酚作川时问，即内泊酚作川3h、sh、24h和48h，分组比较各组Hsp70阳性细胞百分率（%）。4.研究在正常培养条件下不同浓度丙泊酚作用不同时l’rtJ后鼠脑神经元Hsp70mRNA的表达。培养12天的胎鼠大脑神经元随机分为三组:①正常对照组;②14pM丙泊酚处理组:③巧“M丙泊酚处理组。其中②、③组又分为5个亚组，tl、t3、t6、t8和t24，分别代裘5个丙泊酚作用时间，即丙泊酚作用lh、3h、6h、sh和24h，分组比较各组Hsp70mRNA阳性细胞百分率（0，0）。5.研究在正常培养条件下不同浓度丙泊酚作用不同时间后鼠脑神经元Hsc70mRNA的表达。培养12大的胎鼠大脑神经元随机分为三组:①正常对照组;②14pM丙泊酚处理组;③56协M丙泊酚处理组。其中②、③组又分为5个亚组，tl、t3、t6、ts和t24，分别代表5个丙泊酚作用时间，即丙泊酚作用lh、3h、6h、sh和24h，分组比较各组Hse70mRNA阳性细胞百分率（%）。 结果与正常对照组相比，14协M和56 pM丙泊酚作用于胎鼠大脑神经元lh，使神经细胞活力增强;与正常对照组相比，缺氧3Omin使神经细胞活力下降，入O值增高;用14p珑和56 pM丙泊酚预处理和后处理的缺氧鼠脑神经元，与单纯缺氧组相比，在复氧后各时段神经细胞活力均有所增加，但两浓度之间差别无显著性意义:用14pM和56协竹丙泊酚预处理缺氧鼠脑神经元，与单纯缺氧组相比，在复氧后前4h神经元功值降低，两浓度之间差别无显著性意义，而用14协M和56协M丙泊酚后处理缺氧鼠脑神经元，与单纯缺氧组相比，在复氧后前4h，56“M丙泊酚组神经细胞NO值降低，而14协M组神经细胞NO值与单纯缺氧组相比差别无显著性意义:与正常对照组相比，56p姗丙泊酚作川sh IISp7O的表达开始增)J IJ，24h达高峰，l介1 14“M丙泊酚并不能诱导”Sp7（）表达:与正常对照组相比，14“功和56“”内泊酚作川:角均使11sP70mRNA的表达开始增加，8卜达高峰，几两浓度之问差别无显著性J忿义;与此同时，这两个浓度的丙泊酚也使IIsc7（）mf之、A的表达增加，!(l!’ n.高峰时rdJ提前至6h，两浓度之l，nJ差别亦无显著性意义。一、C7（）m仪、A’j一sp7（）m一褚琳在高峰表达时阳性细胞门分率有一定相关性。 4丙泊酚对原代培养胎鼠大脑神经儿缺氧栩杏保护价:川的研究硕L研究’胜学{忆沦文 结论1.在正常培养条什卜，14 oM和洲协M内泊酚为增强神经细胞活力的有效浓度。 2.缺氧3。耐n造成神经细胞损伤。 3.在缺氧条件下，用较低浓度丙泊酚预处理神经元即可阻断缺氧造成的神经细胞损伤，保护时间窗延长至缺氧后4h，产生早期的神经保护作用。若想采用丙泊酚后处理的方法，尸则必须提高丙泊酚的浓度。丙泊酚早期的神经保护作用可能是通过增强神经细胞活力和抑制 的合成实现的。 4.研究丙泊酚诱导 HS时。的表达是本课题的创新之处。高?