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阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年痴呆的主要类型,AD的发病机理复杂多样,其中,氧化应激假说和胆碱能缺失假说与AD的产生及发病症状密切相关,较受重视。基于这两种假说的天然来源的抗AD药物主要集中在植物和陆生微生物,有关海藻的乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究报道不多,而海洋真菌来源的抗AD相关活性的研究也相对滞后。海藻和真菌作为海洋生物类群的重要组成部分,为防治阿尔茨海默症活性先导化合物提供了新颖资源,亟待开发。本研究基于这两种假说,采用乙酰胆碱酯酶(ACh E)抑制活性-1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除活性组合筛选模型,利用TLC筛选法、96孔板筛选法和卤虫致死法对实验室来自湛江等海域的10种海藻和35株海洋真菌进行筛选和毒性评价,得到5株海洋真菌和2种海藻的提取物浓度为200μg/m L时ACh E抑制率大于阳性对照他克林(89.8%),有4种海藻和6株海洋真菌同时具有ACh E抑制活性(200μg/m L时的抑制率大于20%)和DPPH自由基清除活性(200μg/m L时的DPPH清除率大于30%),卤虫致死率分别为:海洋真菌提取物小于12%,海藻提取物小于50%。其中,尚未发现团扇藻(Padina sp.)具有抗阿尔茨海默症相关活性的报道。运用活性偶联的HPLC分析法对其中活性斑点多样性高或差异性大且毒性小的4株海洋真菌C21-1(Penicillium sp.)、C23-3(Aspergillus sp.)、DLEN2008005(Trichoderma harzianum)、TBG1-17(Penicillium corylophilum)和两种海藻(羊栖菜Hizikia fusifarme、团扇藻)的提取物进行活性追踪,从而为后续的分离纯化工作提供指导。筛选结果表明,菌株C23-3的ACh E抑制活性和DPPH自由基清除活性最强,并且活性斑点多样性高。菌株C21-1的ACh E抑制活性斑点明显区别于其他菌株。且海洋真菌的活性明显高于海藻,因而选取菌株C23-3和C21-1进行大量发酵。利用Sephadex LH-20柱、ODS柱及HPLC等手段从C23-3的发酵粗提物中获得3个单体化合物,包括1个抗氧化剂丁内酯Ⅰ(NYY-1),1个抗癌剂土曲霉酮(NYY-2)和1个ACh E抑制剂土震素B(NYY-3);从C21-1的发酵粗提物中获得2个单体化合物,1个广谱抗菌剂(R)-(–)-hydroxysydonic acid(LYM-1)和1个ACh E抑制剂homodimeric WIN 64821(XMX-1),目前尚未发现化合物homodimeric WIN 64821具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的文献报道。并从C23-3发酵物中分离获得3个ACh E抑制强活性粗组分F5、F7和F8,其IC50分别为0.5、13.1和0.63μg/m L;3个DPPH抗氧化中等强度活性粗组分F6、F8和F9,其EC50均小于100μg/m L。由于菌株C23-3活性斑点多样性高,成分复杂,但很多活性产物产量较低。考虑到小分子化学诱导剂常可通过激活某些沉默基因,提高代谢产物产量和多样性,因此本实验室尝试采用组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(丁酸钠和SAHA)、DNA甲基化抑制剂(5-氮杂胞苷和普鲁卡因)、无机盐(Zn Cl2和Cu Cl2)共6种化学诱导剂对该菌株进行表观遗传修饰,以进一步提高目的代谢产物的产量和多样性。对比诱导前后C23-3表观形态变化,运用TLC显色特征和HPLC对其代谢产物进行分析,结果表明,经过伏立诺他(SAHA,100μM)、Zn Cl2(100μM)、丁酸钠(100μM)诱导之后的次级代谢产物中活性组分的产量均有提高,并且SAHA和Zn Cl2诱导组产生了具有抗AD相关活性的新物质。本论文通过筛选,总共得到4种海藻和6株海洋真菌同时具有ACh E抑制活性和DPPH自由基清除活性,并且具有较低的卤虫毒性;从普哥滨珊瑚内生菌C21-1和牡丹珊瑚内生真菌C23-3的发酵产物中分离纯化共得到3个具有抗AD相关活性的单体化合物,包括2个ACh E抑制剂(土震素B和homodimeric WIN 64821)、1个抗氧化剂(丁内酯Ⅰ);并且,采用小分子化学诱导来进行表观遗传修饰的方法,明显提高了菌株C23-3次级代谢产物中丁内酯Ⅰ的产量。