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西黄丸是由牛黄或体外培育牛黄、麝香或人工麝香、醋乳香和醋没药另加黄米配研制成的糊丸;呈黑褐色,气芳香,味微苦。主要用于热毒郁积所致的痈疽疔毒和癌肿等症。目的:本课题拟在药典方法的基础上完善和提高西黄丸质量控制方法,对西黄丸中特征性成分进行定性定量研究,结合指纹图谱分析和聚类分析方法对西黄丸整体质量进行描述和评价,对西黄丸成分进行质谱鉴定研究,为西黄丸的质量控制方法研究提供实验基础。方法:1.1特征性成分的定性定量研究采用薄层色谱法,通过展开剂考察和耐用性考察,对西黄丸中猪去氧胆酸进行定性鉴别以及乳香、没药药材的来源和真伪鉴别;采用RP-HPLC-UV对西黄丸中胆红素进行定量;采用GC-FID对西黄丸中麝香酮进行定量;采用RP-HPLC-ELSD对西黄丸中6种乳香酸类成分:11-羰基-β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸、α-乳香酸、β-乳香酸、3-乙酰基-α-乳香酸、3-乙酰基-β-乳香酸进行定量;采用UV对西黄丸中总氨基酸和总糖成分进行定量。1.2指纹图谱研究采用RP-HPLC-ELSD和GC-FID,通过色谱条件、提取条件优化和方法学考察,建立西黄丸的指纹图谱,标定西黄丸指纹图谱共有特征色谱峰,结合系统聚类、主成分分析和相似度分析对西黄丸的指纹图谱进行识别和评价。1.3成分质谱鉴定研究采用RP-HPLC-ESI-MS,通过质谱条件优化,建立西黄丸中化学成分库,将其导入至Peak view软件中进行匹配,结合其裂解轨规律鉴定化学成分,解析化学成分共同裂解规律。采用GC-MS,经过质谱检索标准库NIST MS search 2.0与PBM Quick search匹配,结合其裂解规律鉴定挥发性成分。结果:1.1特征性成分的定性定量研究在定性鉴别薄层图中,供试品在相同Rf值处与猪去氧胆酸对照品没有与之对应的斑点;在乳香和没药药材的薄层色谱图中,供试品与乳香、天然没药对照药材溶液所显斑点在相同Rf值处均有与之对应的斑点。定量研究中,西黄丸中各成分均表现出良好的线性关系和方法学考察结果,成分含量表现出较好的一致性。1.2指纹图谱研究10批西黄丸不同提取部位指纹图谱方法学均符合要求,标定出其中的25个/22个共有峰,通过模式识别分析,反映出不同批次西黄丸的内在差异,引入“降维”的概念对色谱峰信息进行分析,找出了造成差异的主要化学成分及其对样品差异的贡献程度。1.3成分质谱鉴定研究RP-HPLC-ESI-MS法共匹配出188个化合物,其中乳香成分55个,没药成分114个,牛黄成分15个,麝香成分4个。GC-MS共匹配鉴定出22个化合物,其中醇类化合物6种,烃类化合物4种,酮类化合物4种,内酯化合物2种和含氮化合物1种。结论:本研究逐步深入,在西黄丸原有的质量控制方法基础上进行了完善和提高,指纹图谱、聚类分析、主成分分析和相似度分析等模式识别方法在中药复杂的成分质量控制和评价上表现出良好的适用性,可以较好地反映西黄丸的整体内在质量,质谱LC-MS/MS和GC-MS定性研究共匹配鉴定出210个化学成分,扩展了西黄丸中对化学成分的定性研究,阐明了西黄丸成分基本裂解规律,对检出的成分进行了相对定量,为后续对西黄丸的相关研究提供了实验基础。