论文部分内容阅读
目的：1．了解HSP90β在人胃癌组织中的表达及在人胃癌耐药细胞系中的表达。2．构建反义HSP90βmRNA真核表达载体，转染人消化系肿瘤细胞系，以了解反义HSP90βmRNA对肿瘤细胞药物敏感性的影响。 方法：SABC免疫组化法了解HSP90β在人胃癌组织中的表达及在人胃癌耐药细胞系中的表达。从原始质粒phHSP90中用EcoRⅠ及BamHⅠ消化下一长约1.0kb，3’端为BamHⅠ，5’端为EcoRⅠ的片段，将此片段反向克隆入pcDNA的EcoRⅠ、BamHⅠ位点，构建成反义HSP90mRNA真核表达载体。Lipofectamine介导基因转染入胃癌细胞系SGC7901，胃癌多药耐药细胞系SGC7901／VCR，人肝癌细胞系HCC7402及食道癌细胞系Ec109，用G418筛选出H-SGC7901，H-SGC7901／VCR，H-HCC7402及H-Ec109抗性克隆。用打点杂交及RNA保护分析法证明基因转染细胞有反义HSP90mRNA表达。Western blot及／或SABC免疫组化法检测HSP90β、PGP及TOPOⅡ的表达。MTT法测定转染细胞对化疗药物的敏感性，FCM测定转染细胞内ADR的聚集。 结果：在胃粘膜正常组织，胃炎及癌旁组织中有少量的HSP90β表达。阳性表达率分别为11.76％，13.04％及11.42％，各组之间无显著差异(P＞0.05)。在胃癌组织中HSP90β的阳性信号增强，阳性表达率增高，阳性率为30.00％，显著高于前三组(P＜0.05)。其中在高分化胃腺癌中HSP90β的阳性率为15.38％，中分化腺癌中的阳性率为31.25％，低分化腺癌中的阳性率为33.33％，粘液腺癌中的表达率为42.85％。各组HSP90β的阳性表达率有显著差异，P＜0.05。HSP90β主要分布于胃癌细胞的胞浆中。