枸杞子炮制工艺及其科学内涵研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:vera_00
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目的:中药饮片的炮制规范及质量标准在中药标准化进程中占据着重要地位。本试验对枸杞子表皮蜡质层进行研究,为干燥工艺的优化提供依据。对其主要活性成分及指纹图谱进行研究,确定其检测方法,并以此为基础,结合形性指标,确定最佳酒炖炮制工艺,探究酒炖前后化学成分变化,为建立酒枸杞子炮制规范和质量标准提供依据。方法:对枸杞子鲜果进行不同的预处理,干燥后通过光学显微镜及电子扫描显微镜观察其表皮蜡质层形态,对比不同处理方法对蜡质层形态及水溶性浸出物的影响。采用差示扫描量热仪测定蜡质层热力学性质,确定其熔点。建立枸杞子类胡萝卜素、甜菜碱的含量测定方法,以枸杞多糖、类胡萝卜素、甜菜碱为化学指标,以样品色度为形性指标,采用正交试验设计优化酒枸杞子炮制方法,确定最佳酒炖工艺,并对色度指标和各化学成分含量进行相关性分析,揭示两者的关联性。按照最佳酒炖工艺,对不同产地的15批枸杞子进行炮制,得到相应酒枸杞子。建立酒枸杞子多酚类成分HPLC指纹图谱方法,对15批酒枸杞子进行测定,通过相似度评价软件建立酒枸杞子指纹图谱,采用质谱及标准品比对的方法进行共有峰指认。对比枸杞子及酒炖炮制品的化学成分及指纹图谱变化,进行基于化学成分的炮制原理初步探究。结果:通过枸杞子表皮蜡质层形态研究发现,碳酸钠溶液浸泡的方法可以使蜡质层条带间隙变宽,蜡质结晶减少,有助于水分的排出,但除蜡对水溶性浸出物无显著影响,差示扫描量热仪测得枸杞子蜡质层熔点主要在53 ℃及60 ℃,为使用温度提供依据。建立枸杞子类胡萝卜素、甜菜碱的含量测定方法,确定类胡萝卜素含量测定方法为以石油醚(60~90 ℃)与无水乙醇按照体积比2.6:1作为提取溶剂,初始水温30 ℃,300 W超声提取41min,以β-胡萝卜素为对照品451 nm进行紫外测定。方法学考察表明该方法稳定可靠。甜菜碱采用甲醇超声提取,HPLC-ELSD的方法进行测定,采用NH2色谱柱,以乙腈:水为87:13作为流动相,流速1 ml·min-1,检测条件为载气流速2 L.min-1,漂移管温度80 ℃℃,该方法下甜菜碱分离度良好,方法稳定可行。以枸杞多糖、甜菜碱、类胡萝卜素为化学指标,以色度为形性指标,综合最小距离归一化得分,采用正交试验确定酒枸杞子最佳炮制工艺为加酒量5%,密闭闷润至黄酒刚刚吸尽,炖制4 h。在不同炮制工艺下,色度值各指标与多糖、类胡萝卜素含量成极显著负相关,有较强的相关性,与甜菜碱成显著负相关。采用HPLC的方法,建立酒枸杞子指纹图谱测定方法为C18色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液,流速0.8mL·min-1,进样量20μL,310nm波长下进行检测。该方法稳定可行,建立的指纹图谱中包含13个共有峰,通过质谱及标准品比对指认出3个成分。酒炖炮制后多糖、类胡萝卜素含量显著降低,而甜菜碱含量显著升高,两者的指纹图谱存在明显差异。枸杞子指纹图谱及酒枸杞子指纹图谱各含有两个特有峰,以此建立的酒枸杞子特征图谱可有效判别枸杞子与酒枸杞子。其中酒枸杞子图谱中5-羟甲基糠醛炮制后从无到有且含量显著增多,验证了酒炖过程中枸杞多糖的分解及美拉德反应过程。结论:本研究建立的枸杞子类胡萝卜素、甜菜碱含量测定方法及酒枸杞子指纹图谱测定方法,专属性强,重复性良好,可用于酒枸杞子饮片质量控制。基于此,筛选得出了酒枸杞子最佳炮制工艺,为酒枸杞子炮制规范的制定提供依据。由含量测定及指纹图谱可知,枸杞子酒炖前后化学成分变化显著,为枸杞子酒炖炮制原理及药效研究打下基础。
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