【摘 要】
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目的 1.研究年龄因素对脂肪祖细胞的增殖能力及其外泌体生物学特性的影响（例如外泌体形态,粒径分布,表面标志物等）;2.APC-exo（Adipose progenitor cell-derived exosomes）抗皮肤成纤维细胞衰老的效果研究及其机制探讨;3.比较研究年龄因素的影响:对比不同年龄组来源APC-exo抗皮肤生纤维细胞衰老的效果。方法 本研究共纳入年轻以及年老男性皮下脂肪17例（其
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目的 1.研究年龄因素对脂肪祖细胞的增殖能力及其外泌体生物学特性的影响（例如外泌体形态,粒径分布,表面标志物等）;2.APC-exo（Adipose progenitor cell-derived exosomes）抗皮肤成纤维细胞衰老的效果研究及其机制探讨;3.比较研究年龄因素的影响:对比不同年龄组来源APC-exo抗皮肤生纤维细胞衰老的效果。方法 本研究共纳入年轻以及年老男性皮下脂肪17例（其中年轻组n=8,年老组n=9）,先通过酶消化法获取脂肪血管基质组分（SVF）,然后通过磁珠分选法分选出脂肪祖细胞（Adipose progenitor cell,APC）,对两组脂肪祖细胞进行增殖能力比较。对两组脂肪祖细胞进行扩大培养,收集培养基,通过差速离心法获取外泌体。比较获取的两组外泌体进行粒径;电镜;Western blot检测APC-Exos膜表面标志性蛋白CD63、TSG101、CD9等。验证不同年龄组脂肪祖细胞外泌体对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）成管、迁移能力以及皮肤成纤维细胞迁移能力和纤维化指标变化,以阐明不同年龄组脂肪祖细胞外泌体对血管生成及皮肤纤维化的影响。CFSE实验验证,不同年龄组脂肪祖细胞外泌体对皮肤成纤维细胞、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖能力的影响。运用双氧水诱导法建立皮肤成纤维细胞衰老模型,并将不同年龄组脂肪祖细胞外泌体与衰老的皮肤成纤维细胞共培养,通过western blot、免疫荧光染色等方法检测衰老相关指标（P21、P53、SIRT1）,检测细胞衰老指标β-半乳糖苷酶的变化,通过ROS试剂盒检测培养后细胞内氧化应激水平。信号通路探究,通路分析方面:运用双氧水诱导法建立皮肤成纤维细胞衰老模型,并将不同年龄组脂肪祖细胞外泌体与衰老的皮肤成纤维细胞共培养,共分四组（1）未经双氧水处理正常的皮肤成纤维细胞;（2）经双氧水诱导的衰老皮肤成纤维细胞+PBS;（3）经双氧水诱导的衰老皮肤成纤维细胞+年老组脂肪祖细胞外泌体;（4）经双氧水诱导的衰老皮肤成纤维细胞+年轻组脂肪祖细胞外泌体。探究脂肪年龄因素对皮肤衰老产生的真正影响,探究不同年龄组脂肪祖细胞外泌体的差异,分析原因。结果:1.两组脂肪祖细胞的增殖能力结果显示年轻组脂肪祖细胞增殖能力强于年老组脂肪祖细胞.2.人脐静脉内皮细胞HUVECs经过与不同年龄组脂肪祖细胞外泌体共培养后,HUVEC成管能力和迁移能力增强（p<0.05）,且年轻组脂肪祖细胞外泌体较年老组脂肪祖外泌体增强人脐静脉内皮细胞的作用强于年老组（p<0.05）。3.Transwell实验结果:人皮肤成纤维细胞与不同年龄组脂肪祖细胞外泌体共培养后成纤维细胞迁移能力增强（p<0.05）,且年轻组脂肪祖细胞外泌体较年老组脂肪祖外泌体增强人皮肤成纤维细胞的作用强于年老组（p<0.05）。4.双氧水诱导后的正常皮肤成纤维细胞在β-半乳糖苷酶的染色下呈现明显的衰老表征包括（P21、P53、SIRT1）等的变化（p<0.05）。5.诱导衰老后的成纤维细胞与不同年龄组脂肪祖细胞外泌体共培养后,其染色情况以及衰老相关指标（P21、P53、SIRT1）得以改善。在上述实验中,年轻组脂肪祖细胞外泌体的改善效果均优于年老组（p<0.05）。6.脂肪祖细胞外泌体能降低衰老细胞的ROS水平。结论 脂肪祖细胞来源的外泌体具备一些祖细胞的特性,在创面修复、抗衰老等方面起重要作用.该实验研究证实脂肪祖细胞外泌体能增强成纤维细胞及人脐静脉内皮细胞的功能,通过作用P53/P21细胞信号通路,逆转皮肤成纤维细胞的衰老,且年轻组脂肪祖细胞的外泌体逆转衰老成纤维细胞效果强于年老组脂肪祖细胞外泌体。这可能为逆转皮肤衰老提供了一种潜在的新的治疗思路。
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