【摘 要】
：
蚕桑业是一种与林业资源密切相关的农业产业,一直以来对我国农村农业发展、增加农民收入都具有重要作用。在蚕桑业生产中,蚕茧量的高低直接关系到产业的经济效益及发展前景,因此追求产茧高的多丝量蚕品种一直是蚕桑生产上的重要目标。丝腺是家蚕合成和分泌蚕丝蛋白的唯一器官,是蚕桑业发展的重要生物学基础之一。几千年来通过杂交育种,家蚕的丝腺已经变得越来越大,产丝量也越来越多。但是目前传统的杂交育种已很难提高蚕茧产量
论文部分内容阅读
蚕桑业是一种与林业资源密切相关的农业产业,一直以来对我国农村农业发展、增加农民收入都具有重要作用。在蚕桑业生产中,蚕茧量的高低直接关系到产业的经济效益及发展前景,因此追求产茧高的多丝量蚕品种一直是蚕桑生产上的重要目标。丝腺是家蚕合成和分泌蚕丝蛋白的唯一器官,是蚕桑业发展的重要生物学基础之一。几千年来通过杂交育种,家蚕的丝腺已经变得越来越大,产丝量也越来越多。但是目前传统的杂交育种已很难提高蚕茧产量,分子育种逐渐受到人们重视。而家蚕分子育种的关键就是要找到影响丝腺大小的关键基因。转录因子Senseless是一种锌指蛋白,与其同源物Gfi-1、Gfi-1B、Pag-3等参与肿瘤发生、凋亡、增殖、细胞命运和分化等多种过程。在senseless果蝇突变体中,其唾液腺的大小只有野生型的一半,说明senseless在果蝇唾液腺的发育中起着关键作用。家蚕丝腺与果蝇唾液腺为同源器官,关于senseless在家蚕中如何调控丝腺发育及其对产丝量有何影响目前还没有相关报道。本研究探讨了senseless在家蚕丝腺中的表达模式及其对家蚕产丝量的影响,旨在为生产上提高蚕茧产量提供指导依据。本研究克隆Bmsenseless（Bmsens）基因并分析了其蛋白结构及进化关系,利用q PCR、免疫荧光染色、荧光素酶报告实验以及凝胶阻滞实验等方法探究了Bmsens在丝腺中的时空表达模式及其与转录因子SGF1、SAGE之间的调控关系,最后利用RNAi技术探究了Bmsens对家蚕产丝量的影响。主要结果如下:（1）为了探究BmSens的蛋白结构特点,利用NCBI数据库下载人（Homo sapiens）、大鼠（Rattus norvegicus）、原鸡（Gallus gallus）、果蝇（Drosophila melanogaster）以及秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis remanei）的同源蛋白序列,利用DNAMAN对以上蛋白的氨基酸序列进行对比分析其基序特点,结果显示BmSens蛋白与以上几种物种的同源蛋白质的氨基酸一致性较低,仅有30%左右。但是不同来源的Senseless蛋白质的zinc finger domain结构域保守性较高。在NCBI数据中选取13个物种的同源序列进化分析,结果显示BmSens与天蛾科的烟草天蛾（Manduca sexta）的亲缘关系最近。（2）利用qPCR技术检测Bmsens在1到5龄食桑期与眠期丝腺的表达量,结果显示随着丝腺的发育,Bmsens的表达量不断增加。相对于各个龄期的食桑期来说,其对应的眠期的表达量都较低。1-3龄食桑期表达量逐渐升高,在3龄食桑期达到最高,随后4龄食桑期到5龄第3天的表达量逐渐降低。眠期也是相同的趋势,在2龄眠期表达量达到最高,随后逐渐降低。利用PCR检测Bmsens在5龄第3天家蚕的丝腺、头部、脂肪体、气管、消化管、马氏管中的表达,结果显示Bmsens在以上各组织中都有表达。（3）根据NCBI数据库中查找的Bmsens的全长CDS序列设计两组引物,以丝腺c DNA为模板PCR扩增两段Bmsens,分别命名为Bmsens-LC、Bmsens-SC。构建两种重组表达载体PGEX-4T-3-Bmsens-LC、PGEX-4T-3-Bmsens-SC,测序成功后转化至BL21感受态细胞原核表达得到融合蛋白。将纯化后的蛋白用生理盐水溶解后免疫小鼠,免疫四次后眼球取血并处理得到BmSens多克隆抗体。用前、中、后部丝腺蛋白作为抗原,通过Western blot验证抗体的特异性。结果显示PGEX-4T-3-Bmsens-SC得到的抗体能够与抗原特异性结合,且得到的目的条带大小正确。（4）利用BmSens抗体和核酸染料DAPI对家蚕1到5龄食桑期与眠期丝腺进行免疫荧光染色,结果显示BmSens定位在1到5龄家蚕丝腺的细胞质中及在5龄第3天少量定位细胞核中。提取5龄第3天家蚕丝腺细胞质细胞核蛋白,Western blot进一步验证BmSens在5龄第3天细胞质细胞核皆有定位。（5）通过荧光素酶报告实验和凝胶迁移实验探究Bmsens和FOX类转录因子SGF1以及b HLH类转录因子SAGE之间的调控关系。结果显示转录因子SGF1与SAGE对Bmsens具有正调控作用。当把转录因子SGF1和SAGE在Bmsens启动子上的结合位点突变以后,调控作用消失。凝胶迁移实验进一步证明了Bmsens与SGF1和SAGE之间的调控。（6）利用RNAi干涉技术对4龄食桑期第3天的家蚕体内的Bmsens表达进行干涉。q PCR结果显示干涉后Bmsens的表达量明显降低,蚕体明显变小且体重降低。同时丝腺整体变小,特别是中部丝腺与后部丝腺,相对于对照组明显变细变短。另外蚕茧变小且茧层变薄,干茧重量也显著降低。表明Bmsens对丝腺发育及蚕茧产量具有重要作用。
其他文献
了解土壤侵蚀现状与时空格局,明确风水侵蚀类型区分布,对于水土保持规划治理以及改善生态环境具有重要意义。本文选取河南省兰考县为主要研究对象,以水土保持理论为指导,GF-1、MODIS/NDVI、SMAP Level 3等遥感数据为主要信息源。采用遥感监测技术与野外调查验证的方法,运用风蚀模型以及CSLE模型与Arc GIS平台相结合,对研究区土壤侵蚀格局时空分布以及土壤侵蚀类型区的划分进行研究,以期
森林火灾对森林资源、生态环境和人民生命财产会造成巨大的威胁,尤其是较大、特大的森林火灾,因此做好森林火灾的预防预报工作非常重要,能在一定程度上降低森林火灾的发生率,达到减少森林火灾损失、保护森林资源的目的。如何在更小的尺度上对森林火灾的发生给予更精准的预测预报,有利于在更小的范围内重点关注火险高的林分,布设防火设备和防火力量,做到精准防火,将是今后森林火险预测预报的方向。本研究对泰山的可燃物进行调
白榆（Ulmus pumila L.）具有抗干旱、抗盐碱、耐严寒等特性,是我国北方地区防护林、用材林营建及沙荒地、盐碱地造林的主要树种之一。水分胁迫影响植物生长发育,人工接种真菌能够有效地缓解水分胁迫产生的危害,提高其抗逆性。基于此,本研究以两种白榆品系（Y9、Y65225）为实验材料,通过接种印度梨形孢（Piriformospora indica）（PI）,探究接种对四种水分胁迫（田间持水量28
黑松、赤松是我国东部沿海地区传统的沿海防护林和荒山绿化树种。黑松自19世纪引进我国,赤松则为典型的乡土树种,二者分别为山东传统沿海防护林的建群树种和荒山绿化树种,其生态作用、经济功能、美化功能不容小觑。但现有的山东林区生产能力水平降低、生物多样性下降、生态环境趋于恶化,为了对省内林区进行质量提升,优良的黑松、赤松品系亟待培育、推广。本研究从生长、生理生化和SSR分子标记三个角度,对来自烟台的黑松、
为探索香椿种子萌发及幼苗生长对混合盐碱胁迫的适应特点,明确我国特有经济树种香椿能否适应我国各地区的盐碱地环境。以优质香椿母树种子及香椿幼苗为试材,采用2种中性盐NaCl、Na2SO4和2种碱性盐NaHCO3、Na2CO3按一定比例混合,模拟自然界复杂的盐碱环境。对不同盐碱胁迫下香椿种子萌发规律、幼苗形态结构及幼苗生理生态特征等一系列指标进行测定。综合分析香椿种子萌发及幼苗生长对盐碱胁迫的适应性。结
楸树（Catalpa bungei）属于紫薇科梓树属,是珍贵的优质用材树种和园林观赏树种,也是中国特有树种。具有很高的实用价值,特别是在用材与园林景观绿化方面,具有难以取代的优势。近年来,通过对野生资源的选择利用,产生了较多楸树种质资源。对现有种质进行评价,并开展优良种质选择具有较高的现实意义。本研究以前期收集保存的44份楸树种质资源为对象,利用AFLP分子标记技术,对资源的遗传多样性及亲缘关系进
海岸带防护林建设在海岸带脆弱区生态修复中起到重要作用,由于在营建和后期管理存在着种植密度过大、树种选择单一、后期抚育管理缺乏等原因,导致海岸带防护林生态稳定性较差、优势树种压缩其它树种生存空间等诸多问题,使得海岸带防护林系统整体质量较低,生态服务功能较弱。因此,海岸带防护林生态效益研究受到人们的普遍关注。本文选择青岛藏马山林场作为研究区域,以该区域麻栎林、黑松林、麻栎×黑松混交林、麻栎×刺槐混交林
黄河三角洲滨海滩涂盐碱裸地分布面积广,为提高其植被覆盖率,探索适宜的植被恢复模式,在山东省滨州市泥质海岸带的滨海滩涂地势平坦地段,模拟设置S形、条带形、品字形、月牙形、阶梯形、密条形等六种微地形改造模式,并以光滩裸地为对照。测定分析六种微地形改造模式的土壤水盐动态、土壤理化性质、植物生长状况,对比分析不同微地形改造模式的土方量、地表粗糙度指数,采用主成分及模糊数学隶属函数法等分析方法,评价六种微地
生物质炭是一种含碳量丰富,孔隙度高,比表面积大的多功能材料,在食用菌栽培基质方面具有很好的应用潜力。食用菌是有机绿色食物,市场需求量大,绿色、无公害并且提高食用菌的产量和质量是当前市场诉求,开发和研究生物质炭食用菌栽培基质逐渐受到关注。本论文以生物质炭作为添加剂研发了一种新型食用菌栽培基质,研究了不同生物质炭粒径和添加量对菌丝长速、子实体产量、基质酸碱度和保水率、胞外酶活性以及木质纤维素降解率的影
据统计,目前全球盐碱地总面积约为954万km~2,其中我国盐碱地总量达99.13万km~2,约占国土面积的10%。研究植物抗盐机理,挖掘筛选和充分利用耐盐植物,是利用生物措施改良盐碱地的有效途径。中国柽柳（Tamarix chinensis Lour.）是荒漠盐生植物,具有抗盐碱、耐干旱、抗风沙、耐贫瘠等优良特性,对极端环境适应能力较强。研究中国柽柳对盐胁迫的生理响应,可为其开发利用提供理论基础。