转基因16HBE细胞株的构建及其在致癌活性检测中的应用

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随着科学技术的发展,越来越多的化学物质进入人类生活。数量众多的化学物质在给人类生活带来便利的同时也给人类健康带来一定的威胁,其中尤为受人关注的是各种化学致癌物。为了保证化学物质的安全使用,需要有一套敏感、高效而且特异的致癌活性检测系统用于致癌物的筛查。目前应用的包括短期试验、哺乳动物长期诱癌试验和人群流行病学调查在内的三大类致癌活性检测系统均有其不足之处,因此仍需要对致癌活性检测系统加以完善。为了满足日益增多的化学物致癌活性检测需要,本研究拟构建处于恶性转化前不同阶段的非转化细胞株并探讨其用于致癌活性检测的可行性。正常细胞向癌变细胞的转化过程要经历细胞永生化、分化异常和恶性转移等过程,在这个过程中有癌基因活化,抑癌基因失活等生物学事件的参与。本研究利用逆转录病毒载体介导的基因转导方法在永生化的人支气管上皮细胞16HBE的基础上构建癌基因H-Ras(第12密码子突变)和c-Myc高表达的转基因细胞株(16HBER和16HBEM)。选择已知的致癌物硫酸镍染毒上述细胞株,通过观察硫酸镍诱导细胞转化的结果,初步评价所构建的转化前细胞株在化学物质致癌活性筛查中的应用价值。结论: ①成功构建了癌基因H-Ras和癌基因c-Myc高表达的处于转化前期的人支气管上皮细胞株16HBER和16HBEM。 ②成功构建了具有恶性表型的16HBER.ST和16HBEMST细胞株。 ③癌基因高表达细胞株可以大大缩短细胞转化试验的间期,具有潜在的应用于化学物致癌活性筛查的价值。
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