柑橘木虱Tropomyosin复合体鉴定及其在CLas侵染后差异蛋白研究

来源 :赣南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hou0608
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是目前柑橘种植产业中最具毁灭性的病害之一。目前,世界上大部分柑橘种植区都面临着HLB的威胁,我国南方柑橘主栽省份也因为HLB的爆发给当地造成了巨大经济损失。但是,目前尚无有效的治疗方法能够根治感病树体,所以HLB又被认为是柑橘的“癌症”。HLB病原菌属于韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas),以柑橘木虱(Diaphorina citri)为虫媒载体迅速在果园间传播导致连片果园大面积发病。至今HLB病菌仍不能进行人工培养,而HLB病原菌却能在柑橘木虱体内长期生长繁殖,柑橘木虱一旦被HLB病菌侵染就能够终身携带该病菌。这给深入研究柑橘黄龙病及其防控带来了巨大的困难,是近年困扰柑橘产业的最大难题。在实验室的前期研究中我们借助蛋白质组学技术,发现CLas能够引起柑橘木虱体内原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)等相关蛋白的表达量出现显著差异。已有文献报道某些病原微生物与媒介昆虫宿主的Tm存在互作,并参与体内转运过程,那么柑橘木虱的Tm在CLas侵入的过程中起到了什么作用呢,其响应机制如何?为研究柑橘木虱Tm在CLas侵入过程中的响应研究,本试验克隆表达了Tm蛋白,并制备了多克隆抗体,结合BN-PAGE电泳技术分离木虱Tm复合体,比较分析携带CLas柑橘木虱与未带菌柑橘木虱宿主Tm相关蛋白的差异,最后利用生物信息学综合分析,结果如下:1.根据NCBI数据库提供的柑橘木虱Tm序列,ORF全长共855bp,设计引物。提取柑橘木虱的总RNA合成cDNA,对Tm目的片段进行克隆、诱导表达和多克隆抗体的制备,ELISA法测定其效价≥1:512000。利用该抗体对原核表达蛋白和柑橘木虱总蛋白进行Westren blot检测,结果发现Tm多克隆抗体可以特异性的识别原核表达Tm融合蛋白和柑橘木虱体内Tm天然蛋白。这说明柑橘木虱Tm多克隆抗体制备成功。另外通过qPCR分析发现,Tm在柑橘木虱感染黄龙病后显著下调。2.利用BN/SDS-PAGE电泳技术分离柑橘木虱天然总蛋白,结合Western blot检测,找到Tm蛋白并筛选与Tm互作的蛋白。结果发现,Tm确实与其他蛋白质组装成复合体大小约在146kDa-272kDa之间。进一步对Tm复合体第二向分离和质谱分析,与Tm互作蛋白大多数为能量代谢相关的蛋白,根据功能分为4类,其中有参与氧化磷酸化,糖酵解与三羧酸循环(TCA)等能量代谢相关的蛋白与代谢解毒等功能的蛋白。3.利用BN/SDS PAGE电泳分离感染黄龙病与未感病柑橘木虱的总蛋白,PD-Quest分析找到18个差异蛋白,其中上调的蛋白有11个,下调的蛋白有7个。经质谱分析与STRING分析后,将这些差异蛋白归为三类:第一是能量代谢相关蛋白,涉及碳代谢、氧化磷酸化、TAC循环等代谢通路,大多定位与线粒体上,表达总体呈上调趋势;第二是定位于细胞骨架的相关蛋白,包括微管蛋白等,其表达总体呈下调趋势;第三是,参与氨基酸代谢途径的蛋白,尤其是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异氨酸这四种氨基酸在感病后表达出现显著差异。
其他文献
Monge-Ampère型方程是一类重要的完全非线性二阶偏微分方程,它最早是由Monge[23]和Ampère[1]提出,后来Bernstein,Pogorelov,Nirenberg等也做了深入研究.Monge-Ampère型方程源于最优运输问题,在微分几何中也广泛应用,例如Weyl问题[22]和Minkowski问题[32].Monge-Ampère型方程也应用于仿射几何,共形几何,几何光学等
奶牛舒适度是动物福利在奶牛养殖领域的直接体现,近年来随着社会文明的进步,动物福利的观念更加普及,奶牛舒适度也成为了研究热点。卧床舒适度是奶牛舒适度管理中不可或缺的一部分,卧床作为牛舍环境中与奶牛接触最频繁,最密切的组成部分,对奶牛生产性能的影响不言而喻。基于动物福利的要求,牧场应该为奶牛提供合理、舒适的卧床。卧床的垫料类型和尺寸等因素对泌乳牛的躺卧行为有很大影响,舒适的卧床可以激发奶牛生产潜能,对
目的:本研究通过对比分析利用伴有金属带线锚钉及丝线固定门轴的颈椎后路单开门椎管扩大成形减压术,用来治疗由多节段后纵韧带骨化导致的脊髓型颈椎病的临床效果及术后并发症的发生率,评估临床疗效,比较优越性。方法:本研究收集了2016年01月至2017年12月因多节段后纵韧带骨化所致的脊髓型颈椎病而在南昌大学第二附属医院骨科同一个主刀医生收治,接受“颈椎后路单开门椎管扩大成形减压术”病例资料,并进行回顾性分
第一章主要研究张鸣珂的生平及交游情况。张鸣珂的生平可以概括为乡邦求学、避兵沪上、参军入幕、求学崇文书院、任职书局、吴中结社、充任江西县令几个阶段。求学于薛时雨,使张鸣珂的交游由乡邦文人走向江南文坛的中心,结识了谭献、叶衍兰、张预、许景澄、李慈铭等人。张鸣珂与当时词人的交游是其词学思想以及词风形成的重要基础。张鸣珂与戈载、谭献、叶衍兰、谢章铤等人的交游,也使得张鸣珂的词学思想逐渐发生转变。张鸣珂与他
石楼南区块位于鄂尔多斯盆地东缘晋西挠褶带的南段,其东侧距离石断裂较近,受此影响,区内多发育逆断层,构造较为复杂。该区石炭-二叠系主力煤层埋深较大,普遍超过了1200m,最深
帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种以中脑黑质致密带(Substantia nigra pars compacta,Snpc)路易小体(Lewy body,LB)的形成以及多巴胺(Dopamine,DA)能神经元的变性和丢失为主要病理特征的常见神经退行性疾病。其主要临床症状分为两类:运动症状、非运动症状。运动症状主要包括:禁止性震颤、肌强直和运动迟缓。非运动症状主要包括:
神农香菊(Chrysanthemu indicum var.aromaticum)是近几年发现的野菊(Chrysanthemum indicum)一变种,其花、叶、根均具有浓郁的香气,可用于精油提取、药材加工,是一种极具药用开发价值和园林应用价值的植物。神农香菊主要的有效成分有两类:挥发油、黄酮类化合物。在类黄酮代谢途径中花色素苷生物合成途径是其重要分支,研究类黄酮代谢途径对园林植物花色的改良具有
目的:分析动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmal subarachnoid hemorrhage,aSAH)头皮脑电图特点(electro-encephalogram,EEG),比较EEG不同波形特征与aSAH继发癫痫的关系,探讨头皮脑电图波型对aSAH后癫痫发生的预测价值。方法:回顾性分析我院神经外科2014年1月至2017年1月312例aSAH患者脑电图资料,出院后平均随访半年以上。按照
高红外发射率涂层因其在节能环保领域具有较高的应用价值而受到国内外诸多研究者的关注。目前国内外对于高红外发射率材料的研究主要集中在尖晶石型、堇青石型、钙钛矿型以及多金属复合体系等领域。材料的复合是一种有效的提升材料性能的方法,除了引起掺杂效应外,还有可能生成与原体系完全不同类型的新型材料。本文在镍铬氧化物体系(Cr_2O_3和NiO)中添加氧化硼进行复合,通过旋转喷雾造粒制备团聚的复合粉末后于140
目的:通过研究糖肾康饮及其拆方组含药血清对高糖环境下体外培养的肾小球系膜细胞(GMCs)的增殖抑制作用,以及各组含药血清对于高糖诱导的细胞转化生长因子β1(TGF-β1)及层黏