阿斯匹林对人大肠癌细胞Lovo增殖和凋亡的影响

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目的研究阿斯匹林在体外对人大肠癌细胞株Lovo生长抑制和诱导凋亡的作用,并对其机制做进一步探讨。方法不同浓度的阿斯匹林溶液(100μg /ml、200μg /ml、300μg /ml)处理对数生长的人大肠癌细胞株Lovo,用倒置显微镜每天观察细胞生长情况。采用MTT比色法测量A值,计算对照组和各实验组Lovo细胞的抑制率和生存率;应用流式细胞技术对阿斯匹林作用后的Lovo细胞进行细胞周期分析,并计算细胞凋亡率;免疫细胞化学(ICC)法检测肿瘤细胞中Bcl-2,Bax, Survivin蛋白的表达变化;RT-PCR半定量检测Lovo细胞Survivin mRNA的表达水平,以研究阿斯匹林诱导大肠癌Lovo细胞凋亡的机制。结果MTT法显示阿斯匹林可明显抑制Lovo细胞的增殖,并且随着浓度的增加和作用时间延长而增强,阿斯匹林浓度为300μg /ml的抑制率最大,约为56.9%;流式细胞图上出现亚二倍体“凋亡峰”,定量分析显示,浓度为100μg /ml、200μg /ml、300μg /ml的阿斯匹林诱导Lovo细胞产生的凋亡率分别为13.5%、21.3%、48.3%,与对照组3.2%的凋亡率比较均有显著差异(P<0.05)。随着阿斯匹林浓度的增高,处于G1/G0期的Lovo细胞逐渐增多,G2/M期细胞变化不明显,而处于S期的肿瘤细胞逐渐减少;免疫细胞化学(ICC)结果显示,阿斯匹林处理48h后的细胞形态不规则,胞核染色较深且偏于一侧。胞浆内可见棕黄色颗粒,提示Bax蛋白表达,并且随着干预药物浓度增加,产生棕黄色颗粒的阳性细胞数逐渐增多。而对照组细胞形态基本正常,细胞内仅有少量棕黄色颗粒,Bax蛋白表达水平较低。对照组细胞的Survivin和Bcl-2蛋白高表达,胞浆内可见大量棕黄色颗粒,染色较深。随着阿斯匹林浓度的增加,表达棕黄色颗粒的阳性细胞数减少,且染色也逐渐减淡,提示在阿斯匹林作用下Survivin和Bcl-2蛋白的表达下降。阿斯匹林干预Lovo细胞48h后,RT-PCR检测结果提示肿瘤细胞Survivin mRNA的表达呈浓度依赖性降低。结论阿斯匹林可明显抑制大肠癌Lovo细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。阿斯匹林抗肿瘤的作用机制除已经明确的COX-2抑制作用外,还可能与下调Survivin和Bcl-2的表达、上调Bax的表达有关。
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