论文部分内容阅读
目的:研究人参环氧炔醇(panaxydol)对体外缺氧损伤的Schwann细胞生物学活性、凋亡以及神经营养因子(neurotrophic factors,NTFs)表达、分泌的影响。
方法: 体外建立Schwann细胞缺氧模型,并通过HE染色、MTT法鉴定缺氧模型;不同浓度的人参环氧炔醇作用于体外缺氧损伤Schwann细胞,用MTT法、免疫组化法分别观察细胞活力和凋亡蛋白酶的表达,用免疫组化法、计算机图像分析和ELISA法观察其对Schwann细胞神经营养因子表达分泌的影响,同时用RT-PCR法检测NGF、BDNFmRNA的变化。
结果: 通过HE染色观察缺氧对Schwann细胞形态的变化、MTT检测缺氧对细胞活力的影响,结果显示缺氧15分钟对细胞有可逆性损伤,不会致细胞完全死亡。MTT检测细胞活力显示人参环氧炔醇在5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L药物浓度时对缺氧损伤的Schwann细胞有保护其存活的作用(P<0.05),10μmol/L药物浓度时保护作用最显著(P<0.01);免疫组化法、计算机图像分析细胞内NTFs、Caspase-3表达的相对强度,在10~20umol/L浓度范围内能促进细胞表达表达NGF、BDNF(P<0.05);在5~20umol/L浓度范围内能抑制细胞表达Caspase-3,在10μmol/L抑制作用最显著(P<0.01);ELISA法检测细胞培养上清液中NGF分泌量,结果显示10μmol/L药物浓度时能促进细胞分泌NGF(P<0.05)。RT-PCR检测显示人参环氧炔醇也能促进缺氧损伤的SCs NGF、BDNF mRNA的表达。另外,研究结果显示短暂缺氧能促进Schwann细胞高表达NGF及其mRNA,但降低BDNF及其mRNA的表达;缺氧也能促进Schwann细胞分泌NGF。
结论: 本实验成功建立了简单、安全、有效的Schwann细胞体外缺氧模型。人参环氧炔醇能明显抑制缺氧损伤Schwann细胞表达凋亡蛋白酶Caspase-3,促进Schwann细胞存活,提高其活力。同时,人参环氧炔醇也能促进缺氧损伤Schwann细胞高表达神经营养因子NGF、BDNF。表明人参环氧炔醇通过抑制Caspase-3表达、促进神经营养因子NGF、BDNF高表达,增强Schwann细胞存活能力,提高其生物学活性。而且短暂缺氧能增强Schwann细胞高表达NGF,同时低表达BDNF,提示Schwann细胞在有害因素的刺激下,高表达某些急需的因子促进自身存活。