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白及(Bletilla striata (Thunb.) Reiehb.f.)是兰科白及属植物,其块茎是一种珍稀名贵的中药。白及有效成分主要为多糖类物质,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和促进凝血等多种生物活性,临床上主要用作治疗外科创伤出血、胃溃疡及免疫调节,但其中涉及的白及多糖促凝血及胃溃疡粘膜修复机制尚不清楚。本研究在了解白及多糖物理性质的基础上,进一步研究其相关的药理作用与机制。从而为白及多糖的开发利用提供理论依据。1.白及多糖的碱提、分离、纯化及分析以白及干燥块茎为实验原料,通过碱提、醇沉获得白及粗多糖(Bletilla striata Polysaccharide, BSPS),进一步除去蛋白和小分子杂质后采用纤维素阴离子琼脂糖凝胶层析柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)纯化BSPS,获得五种纯糖组分BSPS-Ⅰ、 BSPS-Ⅱ、BSPS-Ⅲ、BSPS-Ⅳ、BSPS-Ⅴ。经高效液相色谱法检测纯度及分子量;气相色谱法分析单糖组成比;化学方法检测葡萄糖、半乳糖醛酸和蛋白质含量百分比;红外光谱法分析结构组成。结果表明,BSPS-Ⅰ~Ⅴ为均一纯多糖,分子量分别为355.8kDa、174.3kDa、52.8kDa、174.0kDa、59.9kDa。单糖组成摩尔比分别为BSPS-Ⅰ、Ⅲ:葡萄糖;BSPS-Ⅱ:甘露糖:葡糖糖=1.05:4.22;BSPS-Ⅳ:岩藻糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.59:0.7:0.38:1.22:1.93;BSPS-Ⅴ:鼠李糖:岩藻糖:木糖:甘露糖:葡糖糖:半乳糖=1.16:1.93:0.28:0.21:1.17:1.5。2.白及多糖对大鼠凝血系统的影响设置BSPS极低(100mg·kg-1·d-1)、低(200mg·kg-1·d-1)、中(400mg·kg-1·d-1)、高(800mg·kg-1·d-1)剂量组和云南白药阳性组(100mg·kg-1·d-1)。与空白对照组相比,中、高剂量组能够显著缩短大鼠的出血时间(BT)和凝血时间(CT)(P<0.01);测定大鼠的凝血四项,仅高剂量组大鼠血浆中的纤维蛋白原(FIB)含量显著增加(P<0.01);中、高剂量组大鼠血液中血栓素B2(TXB2)的含量递增,6-酮前列腺素(6-keto-PGF1α)的含量递减(P<0.05或P<0.01)。本实验随着BSPS浓度的递增,各组实验结果逐渐趋近于阳性组。结果表明,BSPS可能通过改善机体内源性及外源性凝血机制来影响凝血系统,具有较理想的促凝作用,是有效的凝血止血药。3.白及多糖对乙酸型胃溃疡小鼠的预防作用建立乙酸型胃溃疡小鼠模型,设置空白组、BSPS极低、低、中、高剂量组、乙酸模型组和奥美拉唑阳性组。采用qPCR检测胃粘膜组织中表皮生长因子及其受体(EGF、EGFR)、蛋白酶激活受体1、2(PAR1、PAR2)在转录水平上的相对表达量。结果显示,与模型组相比,极低、低剂量组PAR2和EGFR mRNA无显著性差异,中、高剂量组显著增加(P<0.05或P<0.01),各BSPS给药组EGF和PAR1 mRNA显著增加(P<0.01)。PAR1、EGF、EGFR mRNA以中剂量组表达最高,呈倒V型上升趋势。因此,BSPS能够预防乙酸型胃溃疡,小其作用机制可能是通过提高粘膜中这四种生物因子的表达量。