论文部分内容阅读
本研究采用以牛脑心浸液为基础的液体培养基和巧克力平板接种方法,从某猪场典型传染性胸膜肺炎症状猪的肺脏和扁桃体中分离到1株具有多形性的革兰氏阴性球杆菌。培养特性、生物学特性和生化鉴定结果表明,该分离菌为猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）。采用琼脂扩散试验（GDT）方法,血清型鉴定为1型。 致病性试验表明,分离菌对小白鼠有强致病力,LD50测定为7.2×108CFU。滴鼻感染6头30日龄仔猪,每头7.2×109CFU/5Kg,症状表现为咳嗽,喷嚏,呼吸极度困难;剖检的特征性病变为肺脏萎缩,并与横隔膜粘连;心包膜与胸膜和横隔膜粘连,并与肺脏有不同程度的粘连。对试验猪进行胸膜肺炎放线杆菌分离发现,接种后60h在两头猪血液中分离到APP,72h在5头猪的血液中分离到APP,粪便里不能分离到病原。 根据GenBank上公布的猪胸膜肺炎放线杆菌的APXⅣA基因序列,设计一对引物,筛选最佳反应参数,建立了猪传染性胸膜肺炎的PCR诊断方法。以胸膜肺炎放线杆菌血清1型、3型和7型标准菌株、本研究所分离的APP,实验室保存的沙门氏菌、葡萄球菌、链球菌、巴氏杆菌标准株提取的DNA为模板进行PCR检测。结果表明,APP标准株、分离菌株均检测到APXⅣA基因,扩增出的特异片段大小约400bp,而其它对照菌均未检出。 提取试验猪血、粪和组织中的DNA,用PCR方法检测APXⅣA基因,结果表明,接种后36h可以在血液中用PCR方法检测到该基因,检出率4/6;60h后可以从所有接种猪体内的血液中检测到该基因,检出率6/6。粪样中不能检测到该基因。而对组织的检测表明,肺和扁桃体检出率为6/6,心脏（5/6）、心血（5/6）、气管分泌物（5/6）、肠系膜淋巴结（3/6）次之,肾脏未检出。从猪血液、组织中直接提取DNA检测猪胸膜肺炎放线杆菌的APXⅣ基因,缩短了诊断该病的时间,在国内还未见报道。