基于多壁碳纳米管的人参皂苷的快速分离与分析研究

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lianzi0118
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目的:人参被称为“草药之王”,具有悠久的药用历史。人参含有多种药理活性成分如:人参皂苷、多糖、氨基酸、蛋白质等。其中,人参皂苷是主要的药理活性成分,是最被广泛使用的。本文利用HPLC-MS技术中的多反映检测模式(MRM)对其进行检测,分析多孔碳材料对人参粗提物中人参皂苷的提取效率。已知人参产地繁多,不同产地的人参质量不一,质量参差不齐,目前没有较优良的评价手段,本文通过已知建立的HPLC-MS方法,利用HPLC-MS方法的多反映检测模式(MRM)结合多元统计方法筛选皂苷,并以皂苷含量、种类差异为标准,区分人参生长区域及生长年限进而来评价人参质量的优劣。方法:取25 mg MWCNTs加入到体积为5 ml浓度为200 mg/mL的人参粗提物水溶液中,轻轻振摇2s并以8000 rpm离心2分钟后,MWCNT沉淀用以解吸人参皂苷。将上清液通过0.22μm水过滤器,过滤后的上清液用去离子水补足至10mL容量瓶中。将补足10ml之后的上清液用HPLC-QqQ/MS进行检测,检测8种人参皂苷分别为Re、Rg1、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rf、Ro。MWCNT沉淀加入脱附溶剂,轻轻离心5秒钟,以8000转/分钟离心1分钟,重复3次,合并上清液。将上清液用0.22μm的滤膜过滤,并如前一步骤测量8种人参皂苷的含量。并同时利用苯酚硫酸法测定MWCNT提取皂苷前后的人参粗提物中多糖的含量,从而确定多壁碳纳米管提取人参皂苷的效率。人参经洗涤后干燥至恒重,将干燥至恒重的人参进行粉碎,将粉末过40目药典规定的分样筛,于4℃干燥环境下保存。取1g制备的人参粉和50ml乙醚,加入索氏提取器中于40℃下回流2 h,目的是为了去除人参粉末中溶于乙醚的脂溶性成分;弃去乙醚溶液,然后加入50ml甲醇并在60℃下回流2小时。回流结束后冷却至室温,将提取液于40℃下旋转蒸发至干后,用10ml水溶解提取物,再用30ml水饱和的正丁醇溶液连续萃取3次,以除去强极性成分如糖;合并提取物,将合并的提取物在40℃下涡旋干燥,溶于甲醇并稀释至10ml;过0.22μm石英纤维滤膜后,进行HPLC-MS分析。将获得的数据与多变量统计分析方法结合以筛选皂苷并通过分析人参皂苷的含量及种类来确定人参的产地来源。结果:MWCNTs可以吸附人参粗提物中大部分种类的人参皂苷,对糖的吸附作用不明显,表明MWCNTs可以从人参粗提物中分离糖和人参皂苷。MWCNTs对8种主要人参皂苷都有良好的吸附容量,并可以短时间内达到吸附和脱附平衡,其中原人参三醇类和齐墩果酸皂苷Ro的吸附容量略高于原始人参二醇型皂苷。水饱和正丁醇溶液可以快速的洗脱MWCNTs吸附的人参皂苷并且人参皂苷回收率随着洗脱溶剂体积的增加而增加当洗脱溶剂体积在20 mL以上时,8种人参皂苷的回收率均高于85%。五种不同产地的人参中人参皂苷类型存在差异,相似产区人参皂苷的种类和含量相似。通过三重四级杆质谱中的多级串联模式,鉴定了41种人参皂苷,并且与已知标准品对比,比较人参皂苷的极性差异。利用多变量统计分析技术和人参皂苷提取物通过HPLC-MS检测的全扫描数据,建立了可以区分绥化市,逊克县,虎林市,长白县和汪清县共五个产区的人参模型。并筛选出生产区域与生产年限之间的差异特征组件。结论:使用多孔碳材料从人参粗提物中快速提取和分离人参皂苷,与传统几种方法相比可节省溶剂,节约时间,操作简单等优点,与大孔树脂分离方法相比,MWCNTs具有相同的分离效果和更快的分离速度。5个相似及不同地区的人参中人参皂苷的种类和含量各不相同,由此判断人参质量具有差异性,其中产地对其质量的影响较大,生长年限对其也有一定影响,但影响力不大。
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