大豆孢囊线虫生防真菌的筛选、鉴定及应用基础研究

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大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)属于定居性植物内寄生线虫,在世界各大豆产区均有发生,系大豆上最重要的病原生物之一。本研究从长期繁殖的来自浙江省杭州市、山西省太谷县和安徽省宿州市等大豆孢囊线虫群体的孢囊、二龄幼虫和卵以及大豆根际土壤中筛选高效的生防菌,对潜在生防菌株进行了应用基础研究,获得以下研究结果:1.从大豆根际土壤、大豆孢囊线虫孢囊、二龄幼虫和卵上分离出145株真菌。选取菌落和孢子形态不一致的33株真菌进行了对大豆孢囊线虫的生防评价。发现:菌株HZ-4, HZ-9, HZ-L9, TG-1, TG-15, TG-L37及AH-8等对J2的活动能力有影响;菌株HZ-L9, HZ-9, HZ-L26, AH-1, AH-L6, TG-L5和TG-16等对大豆孢囊线虫孢囊或雌虫内卵的孵化有抑制作用,其中菌株HZ-L9和菌株HZ-9的发酵液原液使孢囊或雌虫中的卵基本不孵化。10x稀释时,两菌株发酵液对线虫孵化抑制率分别达到79.4%和80.6%。2.基于形态学和分子特征将菌株HZ-L9鉴定为绿色木霉(Trichoderma virens),菌株HZ-9为钩状木霉(Trichoderma hamatum)。测定了HZ-L9和HZ-9两菌株孢子悬浮液(浓度为108 cfu/ml)对大豆孢囊线虫的的毒性,发现两菌株对大豆孢囊线虫J2的活性较强,致死率分别达到84.2%和83.3%;此外发现两菌株孢子悬浮液对农林业生产上其他一些重要的线虫——南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)、水稻干尖线虫(Aphelechoides besseyi)和松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)等都有一定活性,如HZ-9对松材线虫毒性较强,致死率达到85.6%,对南方根结线虫的致死率也达到58.3%。3.HZ-L9和HZ-9两菌株盆栽防治大豆孢囊线虫的试验表明:两菌株对大豆孢囊线虫都具有较好的防治效果,随着施用孢子悬浮液浓度的增加,其孢囊抑制率呈升高的趋势,侵入根内的线虫数量呈递减的趋势。当施用孢子浓度达到109cfu/ml时,两菌株对孢囊抑制率分别达到88.3%和87.5%,根内侵入线虫数量与对照相比分别减少80.8%和81.3%,此外发现,两菌株都能对大豆的生长有一定的促进作用。4.生物学特性研究发现:菌株HZ-L9最适生长温度为25-30℃,30℃时产孢量最大;光照条件对其菌丝的生长无明显的影响,在24h光照的条件下,产孢量最大;该菌株生长和繁殖的最适pH为6;碳源对其菌丝生长差异不显著,但在以葡萄糖和果糖作为碳源的培养基上产孢量最大;以硫酸铵和牛肉浸膏为氮源的培养基上菌丝生长最快,而以酵母膏为氮源的培养基上产孢量最大。菌株HZ-9的最适生长温度为25-28℃,28℃时产孢量最大;24h光照时,产孢量最大;菌株生长和繁殖的最适pH为6;在以可溶性淀粉作为碳源的培养基上生长最快,以半乳糖为碳源的培养基上产孢量最大;该菌株生长和繁殖的最适氮源为酵母膏。
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